试验六细胞融合.PPTVIP

实验六 　　PEG诱导动物细胞融合 (必做，验证性实验） 实验目的 了解细胞融合的基本原理,并掌握PEG诱导动物细胞融合的方法 细胞融合的意义 细胞融合能把亲缘关系较远，甚至毫无亲缘关系的生物体细胞融合在一起，为远缘杂交架起了桥梁，是改造细胞遗传物质的有力手段。它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限，扩大了遗传物质的重组范围。 PEG诱导鸡血细胞融合 PEG是乙二醇的多聚物, 存在不同分子量的多聚体,它可改变各类细胞的膜结构, 使两细胞相互接触部位的膜脂双层中脂类分子发生疏散和重组,此时相互接触的两细胞的胞质沟通成为可能,从而造成细胞之间发生融合. PEG介导细胞融合, 其融合效果受以下几种因素的影响:分子量及浓度、pH值、处理时间和温度等. 以鸡血细胞为实验材料，经PEG诱导处理后，形成具有二个或多个核的细胞，可视为融合细胞. 实验材料及试剂 材料：鸡静脉血 试剂：生理盐水； GKN 液； Alsver 液； 50%聚乙二醇 实验结果 观察时注意不同程度的融合现象。通常分为五个阶段： 两细胞（或多细胞）接触，粘连； 细胞膜形成穿孔； 两细胞（或多细胞）的细胞质连通； 通道扩大，两细胞（或多细胞）连成一体； 细胞完全合并，形成一个含有两个或多个核的细胞。 细胞融合过程 * * 概述 细胞融合 细胞融合(cell fusion)是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象称为细胞融合,结果产生杂交细胞(hybrid),亲本相同的融合细胞称为同核体(homokaryon),反之称为异核体(heterokaryon). 细胞融合在机体正常发育的各个时期都可以观察到. 上世纪60年代首次体外人工诱导细胞融合获得成功以来,由于其应用的广泛性和广阔前景,已逐步发展成为重要的细胞工程技术. 人工诱导细胞融合主要包括:病毒和化学融合剂以及电融合和激光融合等方法. 实验原理 采取鸡血 1200r/min,离心三次 5min,5min,10 min 取混合液1mL 混合液 取血细胞沉淀 取适量稀释液 滴加于载玻片 镜检 滴加PEG(稀释液的1/2) 静置3分钟 加入适量GKN稀释 加入4mL生理盐水 加入Alsver液混合 (1:4 v/v) 实验操作流程