皱纹盘鲍亮氨酸氨肽酶基因cDNA克隆及表达分析-集美大学.PDF

　 第２２ 卷　 第５ 期 集美大学学报 （自然科学版） Ｖｏｌ． ２２　 Ｎｏ． ５ 　 　 ２０１７ 年９ 月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｍｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ） Ｓｅｐ ２０１７ ［文章编号］ １００７ － ７４０５ （２０１７ ）０５ － ００３１ － ０９ 皱纹盘鲍亮氨酸氨肽酶基因ｃＤＮＡ 克隆及表达分析 １ １ １ １ １ ，２ １ ，２ １ ，２ 胡健健 ， 陈玉磊 ， 段雪昆 ， 李　 越 ， 张凌晶 ， 刘光明 ， 曹敏杰 （１． 集美大学食品与生物工程学院， 福建 厦门３６１０２１ ； ２ ． 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心， 福建 厦门３６１０２１） ［摘要］ 利用ＰＣＲ 和 ＲＡＣＥ 技术从皱纹盘鲍 （Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｄｉｓｃｕｓ ｈａｎｎａｉ ） 肌肉中克隆亮氨酸氨肽酶基因 ｃＤＮＡ序列， 并对其结构进行分析。 皱纹盘鲍亮氨酸氨肽酶 （Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｄｉｓｃｕｓ ｈａｎｎａｉ ｌｅｕｃｉｎｅ ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ ， Ｈｄｈ⁃ＬＡＰ ） ｃＤＮＡ 全长共３２５１ ｂｐ ， 包含５ ′非编码区 （５ ′ＵＴＲ ） ５６ ｂｐ ， ３ ′非编码区 （３ ′ＵＴＲ ） ６５１ ｂｐ ， 开放阅 读框 （ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ， ＯＲＦ ） ２５４４ ｂｐ ， 共编码８４７ 个氨基酸残基。 多序列比对结果显示， 该氨基酸序 列与太平洋牡蛎 （Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ ｇｉｇａｓ ） 、 霸王莲花青螺 （Ｌｏｔｔｉａ ｇｉｇａｎｔｅａ ） 、 囊舌虫 （Ｓａｃｃｏｇｌｏｓｓｕｓ ｋｏｗａｌｅｖｓｋｉｉ ） 的亮氨酸氨肽酶序列相似性分别为８５％ 、 ６８％ 和６１％ 。 预测Ｈｄｈ⁃ＬＡＰ 基因编码蛋白质的相对分子质量为 ９５ ０９ ｋｕ ， 理论等电点为５ １６ 。 Ｈｄｈ⁃ＬＡＰ 蛋白质的二级结构以α － 螺旋和无规则卷曲为主， 其中α － 螺旋占 ３８ ０２％ ， 无规则卷曲占３０ １１％ ， β － 折叠占２２ ４３％ ， β － 转角占９ ４５％ 。 Ｈｄｈ⁃ＬＡＰ 主要分布在细胞质 （５９ ２％ ） 、 线粒体 （１０ ０％ ） 和溶酶体 （１０％ ） 中， 推测其可能在能量代谢和辅因子的生物合成过程中发 挥信号转导和转录因子调控的作用。 系统发育关系分析结果显示， Ｈｄｈ⁃ＬＡＰ 与牡蛎亮氨酸氨肽酶关系最近。 荧光定量ＰＣＲ 结果表明， Ｈｄｈ⁃ＬＡＰ 基因在鲍肌肉、 肝胰腺、 性腺、 血淋巴细胞、 腮、 外套膜等６ 个组织中 均有表达， 在血淋巴细胞中表达量最高， 肌肉次之， 性腺最少。 ［关键词］ 皱纹盘鲍； 亮氨酸氨肽酶； ｃＤＮＡ 克隆； 生物信息学 ［中图分类号］ Ｑ ７８５ ； Ｓ ９１７ ４ Ｆｕｌｌ⁃ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ Ｌｅｕｃｉｎｅ Ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｄｉｓｃｕｓ ｈａｎｎａｉ １ １ １ １ １ ２ ＨＵ Ｊｉａｎｊｉａｎ ＣＨＥＮ Ｙｕｌｅｉ ＤＵＡＮ Ｘｕｅｋｕｎ ＬＩ Ｙｕｅ ＺＨＡＮＧ Ｌｉｎｇｊｉｎｇ ＬＩＵ Ｇｕａｎｇｍｉ