家畜日本血吸虫检验技术规程.DOC

DB43/436-2009 DB43/436-2009 PAGE 2 PAGE 1 家畜日本血吸虫检验技术规程 1　范围 本标准规定了家畜日本血吸虫病检验的粪样采集、血样采集、检验程序及结果判定等方面的要求。 本标准适用于我省家畜日本血吸虫病的诊断、监测、检疫及流行病学调查。 2　术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1　日本血吸虫病（Schistosomoiasis japonicum） 由分体科分体属的日本血吸虫寄生牛、马、猪、羊、犬、猫等几十种哺乳动物和人的门静脉和肠系膜静脉小血管内的一种人畜共患寄生虫病。 ３　粪样采集 采粪季节适合于春、秋两季，其次是夏季，不适于冬季。采粪时间最好于清晨从家畜直肠中采取，或新排出的未污染的粪便。采粪量：牛、马粪200 g，猪粪100 g，羊和狗粪40 g。每份粪样需附上填好的送粪卡。送粪卡应填上村、组名、饲养员或畜主姓名、畜别、性别、年龄及采粪日期。 4　血样采集 4.1 采血方法 4.1.1 颈静脉采血（用于牛、羊、马等家畜） a）器材：针头12号至18号，牛、马宜用16号针头最好，羊用12号针头为好，小试管（容量5ml，10ml）。均需按常规消毒。 b）方法：将动物保定好，采血点选在颈静脉沟上三分之一处，剪毛消毒后，用左手拇指在采血点下方压紧，其余四指在右侧相应部位抵住，使上部颈静脉怒张，如怒张不明显，可用绳系住颈基部使静脉怒张，右手拇、食、中指拿着针头，对准颈静脉刺入，用试管接取2ml～5ml血即可。 4.1.2 耳静脉采血（用于猪、牛） a）器材：针头12号至16号，小试管（容量5ml~10ml），2ml～5ml注射器。均需消毒。 b）方法：采猪血时，先用绳在耳根捆扎，也可由助手紧握耳根，使耳静脉充分怒张，用酒精棉消毒后，将针头刺入血管，流血后即用左手拇指按着针头，食、中二指托于耳的腹面，然后放松耳根按压处，用右手接上注射器，抽出血液2ml，移入试管中。 采牛血时可由助手压住耳静脉根部，如上方法采血。 4.2 血清的分离与保存 血液进入小试管后应及时密闭管口，在20℃～37℃条件下放置1h左右，然后置入0℃～10℃冰箱中10h至3d，血清便会自动渗出。如不急需进行检验，需将血清分离到另一灭菌试管或瓶中，置于冰箱中备用，在0℃～10℃冰箱中一般可保持14d，在－20℃冰箱中，可保存3个月，保存时间越长，抗体效价越低。 亦可在20℃～37℃条件下放置1h后，用（1500～2000）r／分离心（5～10）min，吸取上清液到另一灭菌试管或瓶中，置于冰箱中备用。 5　粪便毛蚴孵化检查 5.1 材料准备 5.1.1 水 PH值6.8～7.2，无水虫和化学物质污染（包括氯气）的澄清水，分别作如下处理： a）有氯气的自来水应在盛具中存放20h以上； b）河水、池水、井水、雨水等混有水虫的水加温至60℃，冷后再用。或在每5万ml水中加含30%有效氯漂白粉0.35g，搅匀，存放20h，待氯气逸尽；也可在放漂白粉后加入硫代硫酸钠0.2g～0.4g脱氯，30min后用； c）浑浊水，每5万ml水中加明矾3g～5g，充分搅拌待水澄清后用； d）高温季节用水处理，水温高时，毛蚴孵出速度较快，为防止在洗粪、换水过程中将毛蚴倒掉，必须准备1.0％～1.2％的食盐水，代替洗粪用水以抑制毛蚴过早孵出被倒掉。 5.1.2 器材、试剂 竹筷、40目铜筛滤杯、260目尼龙筛兜、500ml沉淀器、1000ml塑料粪杯、放大镜、显微镜、炉、水温计、盆、水缸、水桶、剪刀、闹钟、250ml～300ml长颈平底烧瓶、脱脂棉、食盐。 5.2 操作方法 5.2.1 洗粪与集卵 将每头家畜粪便分为三份，每粪份量：牛50g~100g，猪20g，羊、犬5g~10g。置于粪杯中，加10~20倍普通水调匀，然后用40目铜筛滤杯过滤，弃去粪渣；将滤液倒入260目尼龙筛兜内，加水洗净， 将尼龙兜内的沉淀物取下备用孵化。 5.2.2 孵化 将沉淀物放入平底长颈烧瓶中加满25℃左右清水，在有一定光线的条件下进行孵育。为便于观察毛蚴，在瓶颈下三分之一处加一块2cm～3cm厚的脱脂棉，再加满水。 6　间接血凝试验 6.1 材料准备 6.1.1 V形微孔有机玻璃血凝板（孔底角90°），100ul和25ul定量移液器。 6.1.2 生理盐水、蒸馏水。 6.1.3 诊断液和阴、阳性血清（按说明书处理和保藏）。 6.2 操作方法 6.2.1 用100ul定量移液器加生理盐水100ul于血凝板左边第1孔内，用25ul定量移液器加入被检血清25ul，使血清成5倍稀释。 6.2.2 用25ul定量移液器在板左边第2、3孔中各加生理盐水25ul。 6.2.3 用移液器将第1孔中血清混匀，混匀方法是反复吸吹三次，然后