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发酵工程 济宁学院生命科学与工程系 韩小龙 讲师 手机电子邮箱：hanxiaolong48933@163.com 发酵生产的一般流程 培养基是指利用人工方法配制的供微生物、植物和动物细胞生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质的混合物。 培养基组成对菌体生长繁殖、产物的生物合成、产品的质量和产量、产品的分离精制都有重要的影响。 培养基通常都含有微生物生长繁殖所必须得碳源（能源）、氮源、无机盐、生长因子和水等营养成分。有些还含有前体、产物促进剂和抑制剂等。 五、无机盐和微量元素 主要无机元素：磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁等。 微量无机元素：钼、锌、钴、铜、硼、溴等。微量无机元素需求量很少，但往往会强烈刺激微生物的生长发育。 设计发酵培养基的四个要求： 1．目的明确 首先要明确配制该培养基的目的 实验室研究，不必过多计较成本 大规模的发酵生产 种子培养基与发酵培养基 主流代谢产物 一般指通过主要代谢途径产生的那些结构较简单、产量较高、价值较低的降解产物 次级代谢产物 一般是指通过复杂合成途径产生的那些结构复杂、产量低、价值高的合成产物 2．营养协调 在大多数异养菌的培养基中，各营养要素在量上的比例大体符合以下十倍序列的递减规律： 要素： H2O＞C+能源＞N源＞P、S＞K、Mg＞生长因子 含量： (～10-1)＞(～10-2)＞(～10-3)＞(～10-4) ＞(～10-5)＞(～10-6) 碳氮比（C／N比） 五种常用氮源的含氮量 NH3(82％)＞CO(NH2)2(46％)＞NH4NO3(35％)＞(NH4))2CO3(29.2％)＞(NH4)2SO4(21％) 普通培养基的C／N比为100／0.5～2 谷氨酸发酵培养基为100／11～21 放线菌产蛋白酶培养基为100／10～20 碳氮比(C/N)一般指培养基中元素C与N的比值。为方便测定和计算，人们常以培养基中还原糖含量与粗蛋白含量的比值来表示。 对于生产氨基酸等含氮的化合物时，它的发酵培养基除供给充足的碳源物质外，还应该添加足够的铵盐或尿素等氮素化合物。 发酵培养基的各种营养物质的浓度应尽可能高些，这样在同等或相近的转化率条件下有利于提高单位容积发酵罐的利用率，增加经济效益。 发酵培养基需耗用大量原料，因此，原料来源、原材料的质量以及价格等必须予以重视。 3．条件适宜 要保证发酵过程中pH能满足工艺的要求，合理配制培养基是决定因素，因而在配制培养基选取营养成分时，除了考虑营养需求外，也要考虑其代谢后对培养体系pH缓冲能力的影响。不少微生物有很强的产酸能力，如不适当地加以调节，就会抑制甚至杀死其自身。 （2）渗透压 等渗溶液适宜生长 高渗溶液质壁分离 低渗溶液吸水膨胀 （3）水活度 水活度（ ?w ）：它表示在天然环境中，微生物可实际利用的自由水或游离水的含量。 ?w＝Pw／P0w 式中Pw代表溶液蒸气压力，P0w代表纯水蒸气压力。 纯水?w为1.00，溶液中溶质越多，?w越小。 （4）氧化还原势 氧化还原势：又称氧化还原电位，其单位是V（伏）或mV（毫伏）。一般用Eh表示。 各种微生物对的氧化还原势的要求 好氧微生物：Eh值+0.3～+0.4V 兼性厌氧微生物：+0.1V好氧呼吸 +0.1V进行发酵 厌氧微生物：+0.1V 还原剂： 巯基乙酸（0.01～0.20％）、抗坏血酸（0.1％） 硫化钠（0.025％）、铁屑、庖肉 氧化还原指示剂：刃天青（一种氧化还原指示剂，在缺氧环境下由粉红变为无色） 4．经济节约 (1)以粗代精。 例：红糖与白糖 (2)以野代家。 例：木薯、橡子、薯芋、 (3)以废代好 例：亚硫酸废液、糖蜜、玉米浆 (4)以简代繁 (5)以烃代粮 例：高级醇、脂肪酸和环烷酸 (6)以纤代糖 例：稻草、麦秆、稻壳、棉子壳和玉米芯 (7)以氮代朊 例：氮气、铵盐、硝酸盐或尿素 (8)以国代进 例：五十年代国内青霉素发酵 七、促进剂和抑制剂 1、促进剂： 促进剂是指那些非细胞生长所必需的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。 20 16 10 4 4 6 20 1.5 2.87 2.50 2-4 1.6 1.2 4.4 2 许多真菌 许多真菌 许多真菌 许多真菌 许多真菌 许多真菌 绳状青霉 产气杆菌 米曲霉 泡盛曲霉 曲霉、桔青霉等 栖土曲霉 筋状拟内胞霉 真菌 绿色毛霉 纤维素酶 蔗糖酶 ?-葡聚糖酶 木聚糖酶 淀粉酶 脂酶 右旋糖酐酶 普鲁兰酶 蛋白酶 脂肪酶 蛋白酶 蛋白酶 糖化酶 纤维素酶 纤维素酶 Tween (0.1%) 大豆酒精提取物（2%） 植酸质（0.01%-0.3%) 洗净剂LS (0.1%) 聚乙烯醇 苯乙醇(0