人教版高中生物选修1 微生物的实验室培养 名师公开课省级获奖课件（31张）.ppt

定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。 功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。 无鞭毛的球菌，常形成较小较厚边缘较整齐的菌落，有鞭毛细菌形成大而扁平、边缘波浪或锯齿状菌落 菌 落 菌落 细菌的菌落特征因种而异 形态各异的菌落 小组讨论： 1、各类型的培养基有什么不同？ （先了解培养基如何分类？） 2、无菌技术中消毒和灭菌有什么不同？ （各有什么方法？） 3、无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 4、倒平板操作后，待平板冷凝后，应怎样放置，为什么？ 5、灭菌后的培养基怎样检验是否灭菌合格？ （一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 （1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。 1.培养基的类型 一、基础知识： 固体培养基：菌落，菌苔 半固体培养基： 2.培养基内所含的基本物质 水、碳源(主要是糖类）、氮源、无机盐；另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质，例如：生长因子（即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶）以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 1、获得纯净培养物的关键：防止外来杂菌的入侵 2、无菌技术包括的四大方面(参看教材15页) 3、消毒与灭菌（重点） (1)消毒： ①概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢和孢子吗？ ②方法:煮沸消毒法；巴氏消毒法:如牛奶的消毒；化学药剂消毒:酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等；紫外线消毒。 （二）无菌技术 (不包括芽孢和孢子) 灼烧灭菌 注意适用范围 （2）灭菌 ①概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 ②方法：a灼烧灭菌；b干热灭菌；c高压蒸汽灭菌 微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h 能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿) 高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min 通常用于培养基的灭菌 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎 操作步骤 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌） 8．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 10．无菌检查（补充） 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 2、纯化大肠杆菌 微生物的接种技术 接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作，将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面。 在数次画线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同