MF210-M5HiPerMBP蛋白纯化层析介质6FF-聚合美.DOCVIP

北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd 北京市海淀区学院路甲5号768创意园B-1211 热线电话： （86）010M5 HiPer MBP蛋白纯化层析介质（6FF） 使用说明书 产品名称 单位 货号 M5 HiPer MBP蛋白纯化层析介质（6FF） 5ml MF210-01 M5 HiPer MBP蛋白纯化层析介质（6FF） 25ml MF210-05 【STORAGE】 2-8°C，避免冷冻 【产品简介】 Dextrin MBP 蛋白纯化层析介质（6FF）是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签 蛋白的亲和层析介质，具体性能见表 1。MBP 可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中 过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。本层析介质可以一步纯化 MBP 融合蛋白， 结合的融合蛋白可以用 10mM 麦芽糖进行温和洗脱，保护了标签蛋白的活性。如果要去除 MBP 融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。 【操作步骤】 2.1 Buffer 的准备 所用水和 Buffer 在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。 ? 结合/洗杂 Buffer: 20mMTris-HCl, 200mMNaCl, 1mMEDTA,pH7.4 ? 洗脱 Buffer: 20mMTris-HCl,1mM EDTA,10mM 麦芽糖,pH7.4 注意: 结合液和洗脱液中可加入 1mM DTT 或 10mMβ–巯基乙醇 2.2 样品准备 样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。 2.3 层析介质装填 本层析介质被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装。 层析柱的装填（使用储液器装填） 1. 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱 底部留出 1-2cm 的去离子水。 2. 将层析介质悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。 3. 如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。 4. 打开层析柱底部出口，开起泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。（注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流 速的 75%）当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上 3 倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。 5. 关闭泵，关闭层析柱出口。 6. 如果使用储液器，去除储液器，将分配器至于层析柱中。 7. 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。 8. 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。 2.4 样品纯化 ? 将层析介质装入合适的层析柱，层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进行平衡，使层析介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。 将样品加到平衡好的层析介质中（保证目的蛋白与层析介质充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。 ? 用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。 ? 使用 5-10 倍柱体积的洗脱 Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。 ? 依次使用 3 倍柱体积的结合 Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡层析介质，最后再用 5 倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4℃保存，防止层析介质被细菌污染。 2.5 SDS检测 将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS检测纯化效果。 3. 层析介质清洗 本产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对层析介质进行清洗。 1. 3 倍柱体积的去离子水； 2. 3 倍柱体积的 0.1%SDS 或 0.5MNaOH 溶液； 3. 3 倍柱体积去离子水，20%乙醇 2-8℃保存。 【备注】 本产品仅供科研使用。