属特异性T-RFLP技术在双歧杆菌群落分析中的应用.PDF

微生物学通报 Dec. 20, 2014, 41(12): 2538−2546 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.140275 生物实验室 属特异性T-RFLP 技术在双歧杆菌群落分析中的应用 1Δ 2Δ 3 1 1 1 1* 熊婧 张思璐 魏霜 许梦庭 张静怡 唐书泽 吴希阳 (1. 510632) (2. () 510632) (3. 515041) 摘 要【目的】以双歧杆菌标准菌株为材料，构建双歧杆菌属特异性末端限制性片段长度多 态性分析(T-RFLP)技术，用于微生物群落中双歧杆菌的特异性分析。【方法】采用16S rRNA 基 因的双歧杆菌属特异性引物，5′-端用 HEX 荧光标记，结合通用引物 1510r 进行双歧杆菌特异 性PCR 扩增，软件模拟酶切后选取Hae III 和Alu I 进行限制性酶切，对酶切消化产物的荧光标 记末端测序得到 T-RFLP 峰谱图。同时将该技术与实验室已建立的乳酸杆菌属特异性 T-RFLP 技术相结合，建立多相T-RFLP 技术应用于对市面上益生菌产品的时效性检测。【结果】建立的 方法能够快速准确地对不同种的双歧杆菌及合生元产品中的益生菌进行定性或半定量分析。 【结论】据此，成功搭建T-RFLP 技术用于微生态环境中双歧杆菌的检测，并成功将多相T-RFLP 技术用于市售益生菌产品的时效性检测。 关键词双歧杆菌，T-RFLP 技术，属特异性引物 Genus-specific T-RFLP technique for differentiating Bifidobacteria community in probiotics XIONG Jing 1Δ ZHANG Si-Lu2Δ WEI Shuang3 XU Meng-Ting1 ZHANG Jing-Yi 1 TANG Shu-Ze1 WU Xi-Yang 1* (1. Department of Food Science and Engineering, College of Science and Engineering, Jinan University, Guangzhou, Guangdong 510632, China) (2. Infinitus (China) Co. Ltd., Guangzhou, Guangdong 510632, China) (3. Shantou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shantou, Guangdong 515041, China) Abstract: [Objective] A Bifidobacteria genus-specific T-RFLP technique was developed to differentiate Bifidobacterium strains in microbial communities. [Methods] A Bifidobacteria genus-specific primer (g-bifid-F), based on the bacterial 16S rRNA gene sequence, was 5′-labeled with hexachloroflu