杜鹃红山茶CaAPX基因的克隆表达及功能分析-林业科学研究.PDFVIP

林业科学研究　２０１６，２９（４）：４７１ ４７９ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１６）０４０４７１０９ 杜鹃红山茶ＣａＡＰＸ基因的克隆、表达及功能分析 １，２ １ １ １ １ １ 王江英 ，范正琪 ，殷恒福 ，李辛雷 ，吴　斌 ，李纪元 （１．中国林业科学研究院亚热带林业研究所，浙江省林木育种技术研究重点实验室，浙江 杭州　３１１４００； ２．江苏省连云港市农业科学院花卉研究中心，江苏 连云港　２２２００６） 摘要：［目的］利用分子生物学技术探讨杜鹃红山茶ＣａＡＰＸ基因的表达模式及在模式植物烟草中所起的抗寒、耐热 作用，为今后山茶花抗逆育种奠定基础。［方法］根据山茶花同源序列设计特异性引物，利用同源克隆和３’，５’ ＲＡＣＥ技术，从杜鹃红山茶嫩叶组织中克隆出抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ），命名为ＣａＡＰＸ，基因全长１０９７ｂｐ，开放 阅读框７５３ｂｐ，编码２５０个氨基酸。实时荧光定量ＰＣＲ对杜鹃红山茶７种组织和温度胁迫下该基因的表达模式进 行分析。［结果］表明：ＣａＡＰＸ基因在杜鹃红山茶７种组织中均得到表达，但表达水平不一，表达量由高到低依次 为：未成熟果实＞嫩叶＞花苞 ＞叶芽 ＞种胚 ＞花瓣 ＞花芽，其中，未成熟果实中的表达量是其它组织的２．６８ １１４４倍；温度胁迫处理８ｈ后该基因呈上调表达，ＣａＡＰＸ基因表达量分别是０ｈ的３．４９和２．６７倍。ＣａＡＰＸ基因转 化烟草分析表明，过量表达 ＣａＡＰＸ基因后，ＡＰＸ活性提高了２．５８ ４．０９倍，抗坏血酸（ＡｓＡ）含量提高了２．６７ ３５６倍，并且转基因烟草植株的抗寒、耐热能力也获得提高。［结论］通过过量表达 ＣａＡＰＸ基因能够提高烟草植株 的抗寒、耐热性，为山茶花抗逆育种提供了科学依据。 关键词：杜鹃红山茶；基因克隆；温度胁迫；表达分析；转基因烟草 中图分类号：Ｓ７１８４６ 文献标识码：Ａ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆ ＣａＡＰＸＧｅｎｅｆｒｏｍＣａｍｅｌｌｉａａｚａｌｅａ １，２ １ １ １ １ １ ＷＡＮＧＪｉａｎｇｙｉｎｇ ，ＦＡＮＺｈｅｎｇｑｉ，ＹＩＮＨｅｎｇｆｕ，ＬＩＸｉｎｌｅｉ，ＷＵＢｉｎ，ＬＩＪｉｙｕａｎ （１．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒｅｅＢｒｅｅｄｉｎｇｏｆＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１１４００，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．ＦｌｏｗｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＬｉａｎｙｕｎｇａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ　２２２００６，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＵｓｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｏｆＣａＡＰＸｇｅｎｅｉｎ Ｃａｍｅｌｌｉａａｚａｌｅａ，ａｎｄｔｏｃａｒｒｙｏｕｔｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆＣａＡＰＸｉｎｔｏｂａｃｃｏｕｎｄｅｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓ．［Ｍｅｔｈｏｄ］ ＯｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＣ．ｊａｐｏｎｉｃａ，ａｎａｓｃｏｒｂａｔｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＡＰＸ）ｇｅｎｅｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅ ｔｅｎｄｅｒｌｅａｆｉｎＣ．ａｚａｌｅａｂｙｔｈｅ３’，５’ＲＡＣＥｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｎａｍｅｄＣａＡＰＸ．ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆＣａＡＰＸｉｓ１０９７ ｂｐ，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａ７５３ｂｐＯＲＦｗｈｉｃｈｅｎｃｏｄｅｓ２５０ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．［Ｒｅｓｕｌｔ］Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅ