铁皮石斛DoLEA2基因的克隆表达及功能分析Cloning-药学学报.PDF

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 17, 52 (8): 1337 1344 ·1337 · 皮石斛DoLEA2 基因的克隆、表达及功能分析 鸿, 曾 旭, 郭顺星* ( 中国医学科学院药用植物研究所, 北京 100193) 摘要: 晚期胚胎富集蛋白 (late embryogenesis abundant proteins, LEA) 是一种亲水、热稳定性蛋白, 与植物 抗逆性密切相关, 研究 LEA 家族基因对铁皮石斛抗逆性研究具有重要意义。本研究以铁皮石斛 (Dendrobium off icinale) 种子为材料, 采用RACE 技术获得全长cDNA, 命名为DoLEA2 (GenBank 登录号: KY626329) 。该基 因全长cDNA 为 1 224 bp, 编码3 13 个氨基酸, 具有晚期胚胎富集蛋白 (LEA_2) 结构域和水分胁迫高敏感响应 结构域, 所编码蛋白与其他物种 LEA2 蛋白具有 高相似性, 在进化上与单子叶植物聚为一支, 且与蝴蝶兰 (Phalaenopsis aph rodite ) 亲缘关系最近。铁皮石斛DoLEA2 在叶的表达量最高, 根和茎次之。该基因在Escherichia coli BL21(DE3) 中能够高效表达, 其优化表达条件为: 37 添加终浓度0.5 mmol ·L 1 的异丙基- -D-硫代半乳糖 苷 (isopropyl -D- 1-thiogalactopyranoside, IPTG) 诱导4 h 。盐胁迫条件下与对照组相比, 重组pET28a-DoLEA2 菌株表现出 好的耐盐性。本研究首次获得了铁皮石斛LEA2 全长cDNA 序列, 验证了其耐盐胁迫功能, 为进一 步研究铁皮石斛抗逆性分子机制提供科学依据。 关键词: LEA2; RACE; 表达; 抗盐胁迫 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 17) 08- 1337-08 Cloning, expression and function analysis of DOLEA2 gene from Dendrobium offic inale * LING Hong, ZENG Xu, GUO Shun-xing (Ins titute of Medicinal Plant Developmen t, Chinese Ac ademy of Medica l Sciences, Beij ing 100193, China ) Abstract : LEA (late embryogenesis abundant) proteins that are highly hydrophilic and thermally stable play a role in plant defense. The full-length cDNA of DoLEA2 was cl