食品中动物用药残留量检验方法－卡巴得及其代谢物之检验.docVIP

食品中動物用藥殘留量檢驗方法－卡巴得及其代謝物之檢驗 98年11月4 1. 適用範圍：本檢驗方法適用於畜禽產品中卡巴得（carbadox）及其代謝物之檢驗。 2. 檢驗方法：液相層析串聯質譜分析法（liquid chromatography/tandemmass spectrometry, LC/MS/ MS）。 2.1. 裝置： 2.1.1. 液相層析串聯質譜分析儀： 2.1.1.1. 離子源：電灑離子化正離子（positive ion electrospray ionization, ESI＋）。 2.1.1.2. 層析管：Symmetry? C8，3.5 μm，內徑2.1 mm × 10 cm，或同級品。 2.1.2. 均質機（Homogenizer）。 2.1.3. 離心機（Centrifuge）：轉速可達4000 rpm以上者。 2.1.4. 減壓濃縮裝置（Rotary evaporator）。 2.1.5. 振盪器（Shaker）。 2.1.6. pH測定儀（pH meter）。 2.1.7. 固相真空萃取裝置（Solid phase extraction vacuum manifolds）。 2.1.8. 旋渦混合器（Vortex mixer）。 2.1.9. 氮氣蒸發裝置（Nitrogen evaporator）。 2.2. 試藥：乙腈及甲醇均採用液相層析級；醋酸、磷酸及偏磷酸均採用試藥特級；卡巴得（carbadox，CBX）、脫氧卡巴得（desoxycarbadox，DCBX）及喹噁啉-2-羧酸（quinoxaline-2- carboxylic acid，QCA）對照用標準品。 2.3. 器具及材料： 2.3.1. 塑膠離心管：50 mL。 2.3.2. 容量瓶：50 mL及500 mL 2.3.3. 濃縮瓶：500 mL，褐色。 2.3.4. 固相萃取匣（Solid phase extraction cartridge）：Oasis HLB, 200 mg, 6 mL，或同級品。 2.3.5. 濾膜：孔徑0.22 μm，Nylon材質。 2.4. 試劑之配製： 2.4.1. 0.01%醋酸溶液： 量取醋酸0.01 mL，加水使成100 mL。 2.4.2. 0.3%偏磷酸溶液： 稱取偏磷酸1.5 g，以水溶解並加水使成500 mL。 2.4.3. 0.3%偏磷酸溶液與甲醇以7：3（v/v）之比例混合均勻，臨用時配製。 2.5. 移動相溶液之配製： 2.5.1. 移動相溶液A： 量取醋酸0.05 mL，溶於去離子水500 mL，以濾膜過濾。 2.5.2. 移動相溶液B： 量取醋酸0.05 mL，加至乙腈500 mL中。 2.6. 標準溶液之配製： 取卡巴得、脫氧卡巴得及喹噁啉-2-羧酸對照用標準品各約5 mg，精確稱定，分別以甲醇溶解並定容至50 mL，作為標準原液，於-20℃避光貯存備用。各取適量標準原液混合後，以甲醇稀釋至100 ng/mL，作為混合標準原液。使用時取適量混合標準原液，以0.01%醋酸溶液：乙腈（9:1, v/v）混合溶液稀釋至2.5～100.0 ng/mL，作為混合標準溶液。 2.7 檢液之調製： 2.7.1. 萃取： 將檢體細切均質後，取約5 g，精確稱定，置於均質機中，加入萃取溶液40 mL，均質2分鐘後，移入塑膠離心管中。以4000 rpm離心10分鐘，收集上清液，離心管中之沈澱物再加入萃取溶液10 mL，振盪10分鐘，以4000 rpm離心10分鐘。合併上清液，於40℃水浴減壓濃縮至約10 mL，濃縮液以磷酸調整pH值至4.0～4.5，再以4000 rpm離心10 2.7.2. 淨化： 取2.7.1節供淨化用之溶液，注入預先以甲醇5 mL及水5 mL潤洗之固相萃取匣，以去離子水6 mL清洗固相萃取匣，棄流出液。固相萃取匣以真空抽乾1分鐘，續以甲醇6 mL沖提，收集沖提液，於40℃以氮氣吹乾，殘留物加0.01%醋酸溶液：乙腈（9:1, v/v）混合溶液1.0 mL，以旋渦混合器震盪溶解，經濾膜過濾後，供作檢液。 2.8. 檢量線之製作： 精確量取各標準溶液添加於空白檢體中，依2.7節調製檢液，並參照下列條件進行液相層析串聯質譜分析，就卡巴得及其代謝物波峰面積，與對應之卡巴得及其代謝物濃度，分別製作檢量線。 液相層析串聯質譜測定條件： 層析管柱溫度：40℃ 移動相溶液：A液與B液以下列比例進行梯度分析。 時間（min） A（%） B（%） 0.0 ? 6.0 100 ? 0 0 ? 100 6.0 ? 6.5 0 ? 100 100 ? 0 6.5 ? 10.0 100 ? 100 0 ? 0 注入量：10 μL 移動相流速：0.3 mL/min 毛細管電壓（Capi