荧光测钙系统中单色激发光源设计和应用.pdfVIP

_______________________________________________________________________________ 荧光测钙系统中单色激发光源的设计和应用 * 周云燕 兰李 杨志勇 瞿安连 徐涛 (华中科技大学生命科学与技术学院生物物理与化学研究所 武汉 430074) 摘 要:为了满足荧光测钙实验需要，设计了一种新型的单色激发光源。系统中，短弧氙灯 发射的光经椭球反射镜聚焦后采用抛物面反射镜准直成平行光，通过光栅的衍射分光后经过 会聚物镜把光能量会聚到光纤端面，光纤的另一端面输出单色光。该系统采用光路偏折的方 法，有效地克服了灯源的噪声，光学性能可靠，已经在荧光测钙实验中得到应用，效果良好。 关键词: 单色光源; 光学设计; 光学系统; 荧光测钙 中图分类号 TH74 1 引 言 细胞内自由钙离子浓度（[Ca2＋] ）及其变化在细胞生理活动中有重要的作用，在不同 i 生理条件下测定活体细胞的钙离子浓度是细胞生物物理研究的一个重要内容[1]。由于以荧光 标记法测定活体细胞[Ca2＋] 具有快速、无损伤等诸多优点，故以荧光标记法为基础的活细 i 胞钙离子浓度检测系统在目前得到了广泛应用，其基本原理如图1所示。单色光源发出激发 光，通过耦合系统引入荧光显微镜，并聚焦到样本平面，激发细胞中的荧光探针发出荧光， 采用光电倍增管（PMT ）和CCD采集并记录荧光信号。 为了实现荧光测钙功能，要求单色激发光源系统能达到以下要求：（1）输出的激发光波 长可以连续调节；（2）由于荧光测钙实验中所用的荧光探针的平均吸收波长的峰值从紫外 （300 nm ）到黄绿光（595nm ），就要求单色激发光源系统在此波长范围内输出的能量满足 实验要求；（3）在保证输出能量的前提下，提高光谱纯度[2]。针对这三个要求，本文介绍了 一种用于荧光测钙的单色激发光源系统（Monochromator ）的设计。 2 设计要点 单色激发光源的设计包含三个关键技术：（1）照明光源的确定；（2）分光元件的选取； （3）会聚物镜的设计。 2.1 照明光源的确定 单色激发光源中照明光源的选择取决于荧光探针的吸收光谱，如前所述，荧光测钙实验 中所用的荧光探针的平均吸收波长的峰值的范围是300nm～595nm，较常见的具有这些光谱 的强光源有高压汞灯和氙灯[3] 。高压汞灯是利用金属汞蒸汽在超高压下放电发光的原理制成 的，光度强，弧长短，能量比较集中，但是它的光谱不连续，有的波段强度明亮 （如图2a 所示），因此它的使用就受到谱线的限制。高压短弧氙灯很好地克服了这个缺点，它利用惰 性气体氙气在高压下放电发光的原理制成，发光光谱与太阳光谱相近（如图2b 所示），是 基金项目：国家自然科学基金资助项目(No60071030), 国家自然科学基金重点项目(No _______________________________________________________________________________中国科技论文在线 图1 荧光测钙系统的原理图 连续光谱，波峰在450 nm～ 500 nm 之间，在整个需要的波长范围内 （300nm～595nm ）光 谱平缓。在采集不同的单色光时不会发生明显的能量波动。它的操作很方便，启动立即点燃， 发光过程中，弧光稳定，色温不变，而且它的光通量、辉度都很高，使用寿命很长，因此本 文就采用氙灯作为照明光源。 1 1 y t i s n e t n 0.5