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实验八 细胞融-小鼠骨髓瘤SP20细胞与小鼠脾细胞融合
一、实验目的 了解细胞融合的原理 掌握细胞融合的基本方法 二、实验原理 二、实验原理 病毒诱导融合 聚乙二醇诱导融合 电场诱导融合 激光诱导融合 三、仪器、材料与试剂 仪器： 离心机、 CO2培养箱、超净台、 37℃恒温水浴锅、显微镜、血球计数板、解剖器械、烧杯、载玻片、盖玻片、离心管。 材料： SP2/0细胞、昆明小鼠 试剂： Hanks液、45%PEG ，75%乙醇 四、实 验步骤 （1）小鼠摘眼球放血（可不做）, 拉颈 处死，浸泡在75%酒精内，3～5min （2）无菌取脾脏， Hanks液洗一次，脾脏剪碎，培养液洗 一次，过不锈钢筛网，转移至10mL离心管 （3）800g 离心10分钟，取沉淀细胞用Hanks液洗2次（每次加入5mL溶液，轻轻混匀800g 离心10分钟） 实验报告 1. 观察对照组,辨认两种细胞,看两种细胞是否融合。 2. 观察实验组,找出同种融合细胞和异种融合细胞。 3. 试说明影响细胞融合的关键因素。 * * 实验八 细胞融合----- 小鼠骨髓瘤SP2/0细胞与小鼠脾细胞融合 细胞融合的概念 常用的诱导融合手段有哪些？ 细胞融合的概念 （4）细胞计数，待用。 （5）取对数生长骨髓瘤细胞， 800g 离心10分钟，取沉淀细胞用Hanks液洗2次（每次加入5mL Hanks液，轻轻混匀800g 离心10分钟） （6）细胞计数，待用。 （7）将骨髓瘤细胞(105-6)与脾细胞(106-7)按1：10比例混合在一起800g 离心10分钟，弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇（PEG）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。 （每组混合两份样品) （8） 90s内加入37℃预温的1mL 45%PEG（分子量4000）或Hanks液，边加边轻微摇动。37℃水浴90s。 （9）加37℃预温的Hanks液8mL以终止PEG作用 （10） 800g 离心10分钟，弃上清，加入1mL Hanks液，镜检
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