第二章 酶与细胞的固定化课件.pptVIP

优点：条件温和，操作简便，酶活力损失少。 缺点：结合力弱，易解吸附。 不同固定化方法的比较 1967年Updike等采用酶的固定化技术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧电极结合，组装成了世界上第一个生物传感器——葡萄糖氧化酶电极。 继酶传感器（enzyme sensor）后，又出现： 细胞器传感器（cell organelle sensor） 组织传感器（tissue sensor） 微生物传感器（microbe sensor） 免疫传感器（immunosensor） 1）酶传感器的原理 生物传感器 由生物识别单元（如酶、微生物、抗体等）和物理转换器相结合所构成的分析仪器。 生物识别元件(Biological recognition element) 是酶、抗原(体)、细胞器、组织切片和微生物细胞等生物分子经固定化后形成的一种膜结构，对被测定的物质有选择性的分子识别能力。 换能器(Transducer) 将识别元件上进行的生化反应中消耗或生成的化学物质，或产生的光或热等转换为电信号，并呈现一定的比例关系。 2）酶传感器的应用 水质监测 用化学法测定酚时，硫化物、油类等可干扰其测定。 从马铃薯中提纯、经吸附交联得到的固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，可检测大多数酚类化合物。 大多数鱼死后5～20h，ATP，ADP和AMP已分解尽，超过24h，鲜度主要取决于IMP--肌苷---次黄嘌呤---尿酸。 将这三个步骤的三种酶（5’－核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。 当K＜20时，鱼极新鲜，可供生食。 K在20～40之间为新鲜，必须熟食。 K大于40，不新鲜，不宜食用，这与嗅觉检验结果相一致。 肉鲜度传感器 肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。 用腐胺氧化酶与过氧化氢电极构成多胺生物传感器，或用单胺氧化酶膜和氧电极组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。 污染微生物及病原菌的检测 1通过免疫学方法，即获得相应的特异性抗原和抗体进行分析和检测。 葡萄糖酶电极 酶电极示意图 ?－D－葡萄糖＋O2 D－葡萄糖酸－1，5－内酯＋H2O2 半透膜 酶胶层 感应电极 Glucose Gluconic acid Glucose oxidase Oxygen Hydrogen peroxide Membrane Electrode 根据反应中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧电极、pH电极和H2O2电极来测定葡萄糖的含量。 酶传感器工作原理示意图 酶传感器主要由固定化酶膜和变换器组成： 固定化酶膜：选择性地“识别”并催化被检测物质发生化学反应； 变换器：把催化反应中底物或产物的变量转换成电信号，通过仪表显示出来。? 德国研发的环境废水BOD分析仪 医疗方面 葡萄糖传感器和血糖测定仪 用葡萄糖氧化酶（glucose oxidase,GOD）制成葡萄糖传感器，可测定血液中葡萄糖浓度。 手掌型葡萄糖(glucose)分析仪 SBA-50型单电极生物传感分析仪 SBA-70型血糖乳酸自动分析仪 食品鲜度 鱼鲜度传感器 在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度的测定。鱼死后体内ATP经酶解依次形成ADP、AMP、IMP、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可用K值表示： K=肌苷+次黄嘌呤/ ATP +ADP+AMP+IMP +肌苷+次黄嘌呤+尿酸 (1)将适宜的酶与抗原或抗体结合在一起。制成酶标抗体（或酶标抗原 ）； (2)将酶标抗体（或酶标抗原）与样品中的待测抗原（或抗体）混合，通过免疫反应二者即可特异性地结合在一起，形成酶－抗体－抗原复合物。通过酶催化反应的速度即可测定复合物中酶的含量，进而测出样品中的待测抗原（或抗体）的量。 2.酶联免疫测定 思考题： 可变 可变 不变 不变 不变 底物专一性 中等 高 低 低 低 费用 不能 不能 不能 可能 可能 再生 中等 低 高 高 高，酶易流失 活力回收 强 强 强 中等 弱 结合程度 较难 难 较难 易 易 制备难易 交联法 共价结合法 包埋法 离子吸附法 物理吸附法 固定化方法 吸附法 各种固定化方法的优缺点比较 死细胞:完整细胞,细胞碎片, 细胞器 活细胞:增殖细胞,静止细胞, 饥饿细胞 生理状态 微生物 植物 动物 细胞类型 固定化细胞 分类方式 固定化细胞 分类方式 （二）细胞的固定化方法 1.固定化细胞的分类 1) 直接固定法