实验3 光合细富集分离.pptVIP

实验二——富集培养物的分离 光合细菌的富集培养 * 光合细菌：具有原始光能合成体系的原核生物，是在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称 应用：净化水质、饲料添加剂、减少鱼类病害、培养有益藻 光合细菌的富集培养 1.采样：选取有机污染严重的水塘或有机质丰富的园地做为采样地点。 2.样品的富集： a 无菌操作分别取泥样1g或水样1mL于厌氧管中（厌氧管已灭菌）； b 加半固体培养基至满，拧上螺口帽，造成厌氧环境； c 在温度为30℃，光强为3000～5000lux下培养箱中培养1－2周。 * 示意图 * First. 1 g 土壤或1 ml污水 Second. 半固体培养基（加满） 光照富集培养2周 半固体琼脂法创造相对厌氧环境分离（在好氧平板上不能形成单菌落）。 富集样品一周 观察富集液颜色 继续转接富集 分离单菌落 颜色不明显 颜色明显 分离单菌落 通常光合细菌菌数的数量级为108左右，确定稀释的梯度为10-1~10-7 （正确计算） 分离单菌落 1 2 3 4 5 6 7 0.9 ml的生理盐水 分离单菌落 1 2 3 4 5 6 7 菌液 0.1ml菌液 分离单菌落 1 2 3 4 5 6 7 0.1ml的10-1菌液 注意：每次稀释前摇匀！ 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1 分离单菌落 10-7 10-6 10-5 取0.1ml 加半固体培养基至满，塞上橡皮塞，颠倒混匀，每个梯度分别做两个平行 温度为30℃ 光照强度3000～5000lux 光 照 培 养 箱 中 培 养 七 天 思考 根据以上步骤，需准备什么？ 离心管、管架、生理盐水、移液枪、枪 头、小试管、橡皮塞、半固体培养基 （参照上节课）、无菌操作所要的准备等 光合细菌培养基的配制 光合细菌是一群能进行光合作用的原核生物，分产氧光合菌（即蓝细菌）和不产氧光菌，通常所说光合细菌是指不产氧光合细菌 以厌氧异养光养生长的紫色细菌在自然界分布广、功能多样、应用价值最大。 多生活在有机质丰富，且光线能到达的的环境中。 用含小分子有机物和大量、微量元素、微生素的培养基在光照下可富集分离。 半固体琼脂法创造相对厌氧环境分离（在好氧平板上不能形成单菌落）。 培养基母液配制 乙酸钠母液(0.2g/ml) NH4Cl母液(0. 1g/ml) 磷酸缓冲液母液(1M) 大量元素溶液 微量元素溶液 维生素溶液 酵母膏(0.1g/mL) 培养基母液中所加母液的量 乙酸钠母液 NH4Cl母液 磷酸缓冲液母液 大量元素溶液 微量元素溶液 维生素溶液 酵母膏 10ml/L 10 ml/L 5ml/L 10 ml/L 1 ml/L 1 ml/L 1 ml/L 加水960ml 每组配200 ml (固体） 2ml 2 ml 1ml 2ml 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 加水192 ml 调pH值=6.9 半固体培养基：加0.4% 琼脂 厌氧培养 海水培养基：加2.5% NaCl