TaqMan探针荧光定量PCR反应试剂盒.DOCVIP

TaqMan探针荧光定量PCR反应试剂盒使用说明书（Cat#Yu-R01-2） 【产品介绍】 TaqMan荧光探针的5’末端连接荧光基团，而淬灭剂则在3’末端。PCR扩增时在加入引物的同时加入特异性的荧光探针。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。 本公司专利技术生产的TaqMan探针荧光定量PCR反应试剂盒含有荧光增强剂，对FAM、HEX和VIC等荧光物质的有明显的荧光增强效果，灵敏度高，结果可靠，性能优良，在许多性能上完全超越国外同类产品。 【产品特点】 1. 适用于使用Taqman-TAMRA和Taqman-BHQ1等探针的实时荧光定量PCR，对FAM、HEX和VIC等荧光物质的有明显的荧光增强效果。结合本公司的各种游离DNA提取试剂盒（Cat#Yu-CF-01-1，Cat#Yu-CF-01-2，Cat#Yu-CF-02-1，Cat#Yu-CF-02-2），可以进行游离DNA的定量检测。 2. 灵敏度高：本产品的扩增效率明显高于进口产品（图1）。 3. 稳定性好：本产品重复好，CV值2%。 4. 操作简单： 只需在反应体系中加入引物、探针、模板和ROX。 5. 本产品使用热启动酶，可以进行Hot Start法PCR反应。 6. 本产品无本品无OSHA规定的危险物品，安全无化学污染。 【适用仪器】 Thermal Cycler系列荧光定量PCR仪、Applied Biosystems系列荧光定量PCR仪、Roche Diagnostics LightCycler系列荧光定量PCR仪、Bio-Rad CFX96 Real-Time PCR Detection System等。 图1 本产品扩增β-globin基因结果与进口产品的比较。 【试剂盒组成】 试剂盒组成 数量 保存条件 TaqMan探针荧光定量PCR反应预混液（5×） 250μL -20℃保存 Rox dye 2（50×） 15μL -20℃保存 ddH2O 1mL 使用说明书 1份 【规格】50T/盒 【贮藏与有效期】PCR反应预混液-20℃保存，有效期12个月。开盖后，4℃保存，有效期2周。Rox dye 2（50×）-20℃保存，有效期24个月。 【有效成分】Tris-Hcl，氯化钾，氯化镁 【自备试剂】 无 【注意事项】 使用前务必认真阅读以下注意事项。 1. 使用前充分融解，轻轻颠倒混匀，避免起泡，短暂离心后使用。 2. 反应液的配制和分装务必使用无污染的尖嘴、EP管等。 3. 如果配制试剂时间较长，请将融解后的反应液于冰上放置。 4. 试剂盒仅供科研使用。 【操作步骤】 1、在无菌洁净PCR管中依次加入以下试剂： 成分 加入量(μL) 终浓度 PCR反应预混液（5×） 5 1× 上游引物（10μM） 0.5 0.2μM 下游引物（10μM） 0.5 0.2μM 探针（10μM） 0.75 0.3μM 模板 10 ddH2O 8 Rox dye 2（50×） 0.25 总体积 25 注：以下仅为建议，最佳条件需要各个实验室摸索。 ①通常引物浓度为0.2μM可以获得很好的结果。反应不佳时，引物浓度可以在0.1~1μM范围内调整。 ②使用的探针浓度与定量PCR仪、探针种类和荧光标记物质有关。通常探针终浓度在0.1~0.5μM范围内调整。 ③模板添加量因模板溶液中靶基因的拷贝数不同而不同，模板添加量最好在100ng以下。 ④ Rox是否加入视仪器而定。 2、充分混匀后短暂离心。 3、扩增：95℃预变性30秒；95℃变性5秒，60℃退火40秒，共40个循环。 注：以下仅为建议，扩增最佳条件需要各个实验室摸索。 ①本试剂盒扩增结束后的ΔRn值一般大于1.0，如果ΔRn值小于0.8可视为扩增效果不佳。 ②扩增效果不佳时可以考虑改变退火温度，或由两步法改为三步法。