多重微滴式数字PCR定量检测售核桃乳中核桃大豆源性-食品科学.PDFVIP

280 2017, Vol.38, No.16 食品科学 ※安全检测 多重微滴式数字PCR定量检测市售核桃乳中 核桃、大豆源性成分 杨 硕，江 丰，刘 艳，李诗瑶，王鸣秋，马 弋，林 敏，张 莉* （湖北省食品质量安全监督检验研究院，湖北武汉 430000 ） 摘  要：目的：为市售核桃乳中核桃源及主要掺杂物种大豆两种源性成分建立准确、快速定量检测方法。方法：从 植物组织（核桃、大豆）或是植物蛋白饮料（核桃乳饮料）提取核酸后，主要采用多重微滴式数字聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction ，PCR ）技术，测算单位质量核桃和大豆的目的基因拷贝数比值，建立基因拷贝数与质 量之间的关系，进而利用该比例关系换算出植物蛋白饮料中核桃和大豆的投料量，以实现对植物蛋白饮料中植物源 性成分的定量检测。结果：基于多重微滴式数字PCR定量检测市售产品中大豆和核桃源性组分的方法，引物探针特 异性好，目标物种间无交叉反应；灵敏度高，核桃中掺杂大豆的质量检测限为0.5%，相对误差为5.6% 。将单一源 性5 种不同质量下靶基因拷贝数之比与5 种不同比例混合源性靶基因拷贝数之比通过重复3 次检测，综合比较并拟 合后得到单位质量下拷贝数（C大豆/C核桃=1.771 1 ）的换算比例值。在从商品超市中抽取的11 份不同品牌的核桃乳中 （仅含核桃一种植物源成分），多重微滴式数字PCR方法检测显示：11 份样品均检出核桃源性成分，6 份样品检出 大豆源性成分，其中4 份样品中大豆与核桃质量之比高于10%，判断存在掺杂使假；2 份样品大豆与核桃质量之比 低于0.2%，极低的检出量推断为工艺沾染。结论：采用多重微滴式数字PCR准确、快速的定量方法可作为鉴别核桃 乳中掺杂使假问题的有效手段。 关键词：核桃乳；多重微滴式数字PCR ；投料比；掺杂使假 Duplex Digital Droplet PCR for the Determination of Walnut-Derived and Soybean-Derived Ingredients in Walnut Protein Drink * YANG Shuo, JIANG Feng, LIU Yan, LI Shiyao, WANG Mingqiu, MA Yi, LIN Min, ZHANG Li (Hubei Provincial Institute for Food Supervision and Test, Wuhan 430000, China) Abstract: Objective: The aim of this study was to establish a new method for the rapid and accurate quantification of walnut-derived ingredients and adulterated ingredients, mainly derived from soybean, in commercial walnut beverage using droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR). Methods: This method was based on the ratio between the numbers of target gene copies per unit mass of walnut and soybean, which coul