靶向包膜蛋白的HIV进入抑制剂非感染性定量筛选-南方医科大学学报.PDF

2010;30(5) 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 窑941 窑 靶向包膜蛋白的HIV进入抑制剂非感染性定量筛选方法的研究 1 2 2 2,3 2 1 李珉珉 袁 夏承来 袁 毛芹超 袁 姜世勃 袁 刘叔文 ( 暨南大学附属第一医院临床医学检验中心袁 广东广州 2 3 510630曰 南方医科大学药学院袁广东广州510515曰 美国纽约血液中心LFK研究所袁纽约NY10021) 摘要院目的 HIV包膜蛋白能介导细胞与细胞之间的融合袁本项目旨在建立一种靶向包膜蛋白的HIV 进入抑制剂非感 染性定量筛选方法遥 方法将表达包膜蛋白gp120/gp41 和Tat等HIV蛋白的HL2/3 细胞与表达CD4 和由HIV长末端 重复片段渊LTR冤启动的茁-半乳糖苷酶的HeLa-CD4-LTR-茁-gal 细胞混合袁采用氯酚红茁半乳糖苷渊CPRG冤为显色底物 检测 茁- 半乳糖苷酶的表达遥 用特异性的 HIV 进入抑制剂对检测方法进行验证遥 结果 HL2/3 细胞与 HeLa-CD4-LTR-茁-gal 细胞共育不能形成合胞体袁但二者能发生膜融合袁导致效应细胞表达的Tat 蛋白与靶细胞中LTR 结合袁启动茁-半乳糖苷酶的表达遥CPRG方法能灵敏地检测细胞中茁-半乳糖苷酶的含量遥特异性的HIV进入抑制剂能 够抑制茁-半乳糖苷酶的表达袁且具有剂量依赖性遥 结论这一非感染性定量的方法能客观定量地筛选作用于HIV进入 阶段的抗HIV药物袁且操作方便尧廉价尧无感染性袁用于天然和合成来源的小分子抗艾滋病药物的筛选遥 关键词院HIV进入抑制剂曰细胞融合曰茁-半乳糖苷酶曰药物筛选曰氯酚红茁半乳糖苷 中图分类号院R96 文献标识码院 文章编号院1673-4254渊2010冤05-0941-04 A non-infectious and quantitative cell-based bioassay for screening HIV entry inhibitors targetingHIVenvelopeproteins 1 2 2 2,3 2 LIMin-min ,XIACheng-lai,MAOQin-chao,JIANGShi-bo ,LIUShu-wen 1 2 Center of Clinical Medicinal Laboratory, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510630, China; School of 3 PharmaceuticalSciences, SouthernMedicalUniversity, Guangzhou510515, China; LFKResearchInstitute, NewYorkBloodCenter, NewYork,NY10021 Abstract:ObjectiveTodevelopanobjectivebioassayforquantitativedetectionofHIV-inducedcell-cellfusionforscreening HIVentryinhibitors. MethodsHL2/3cellsexpressingHIVenvelopeproteinsgp120/gp41,Tat,andotherHIVproteinswere co-culturedwithHeLa-CD4-LTR-茁-galcellsexpressingCD4receptorandHIVLTRtriggeredrepor