基因工程的基本操作程序课件.pptVIP

2．目的基因的导入 (1)不同受体细胞的常用导入方法 生物种类 常用方法 受体细胞 植物细胞 农杆菌转化法 体细胞 动物细胞 显微注射法 受精卵 微生物细胞 Ca2＋处理法 原核细胞 生物种类 转化过程 植物细胞 目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 动物细胞 目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 微生物细胞 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 * * 1．2　基因工程的基本操作程序 课标领航 1．阐述基因工程的原理。 2．掌握并理解基因工程的基本操作程序。 3．尝试设计某一转基因生物的研制过程。 【重点】　基因工程的原理及基本操作程序。 【难点】　基因文库；PCK扩增过程；目的基因的检测。zxxk 看到这幅图，联系基因工程，你有何感想？让植物和动物合为一体可能不好实现，但我们能不能通过基因工程技术，让这一愿望实现呢？实际上，基因工程技术已经实现了人们的许多看似异想天开的愿望或构想。 情景导航 核心要点突破 基础自主梳理 知能过关演练 1．2　 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 基础自主梳理 一、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取。 2．______________的构建。 3．将目的基因导入_________。 4．目的基因的检测与鉴定。z.xxk 基因表达载体 受体细胞 二、目的基因的获取 1．目的基因：主要是指编码________的结构基因。 2．获取方法 (1)从基因文库中获取 ①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多______片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 蛋白质 DNA 所有 思考感悟 1．怎样从基因文库中得到我们需要的目的基因？ 【提示】　可以根据目的基因的有关信息，例如，根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的翻译产物蛋白质等特性来获取目的基因。 (2)利用PCR技术扩增目的基因 含义 原理 前提条件 扩增过程 结果 一项在生物体外___________________的核酸合成技术 DNA_________ 有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成______ 目的基因DNA受热→变性解旋为_____→引物与单链相应互补序列结合→在_____________作用下延伸→形成新的DNA分子→循环重复以指数形式扩增z.x.xk 以指数形式扩增：2n 复制特定DNA片段 双链复制 引物 单链 DNA聚合酶 (3)人工合成法：如果基因较小，核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 目的基因 目的基因 首端 RNA聚合酶 终止子 2．功能：(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。 (2)使目的基因______表达和发挥作用。 能够 思考感悟 2．如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 【提示】　以四环素抗性基因为例，程序如下： 四、将目的基因导入受体细胞 1．转化：__________进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和_____的过程。 2．导入植物细胞 (1)方法：_______________、基因枪法、花粉管通道法。 (2)农杆菌特点 ①易感染双子叶植物和祼子植物。 ②Ti质粒上的_________可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体DNA上。 目的基因 表达 农杆菌转化法 T－DNA 3．导入动物细胞 (1)方法：______注射技术。 (2)常用受体细胞：受精卵。 4．导入微生物细胞 (1)原核生物特点：繁殖快、多为________、遗传物质相对较少等。 (2)对受体细胞的常用处理方法：用______处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)。 显微 单细胞 Ca2＋ 思考感悟 3．从细胞器的功能上分析，若通过基因工程生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 【提示】　不可以，糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的，而内质网和高尔基体存在于真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞中不含有这两种细胞器。 五、目的基因的检测与鉴定 1．检测及方法 (1)检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因，采用DNA分子杂交技术。 (2)检测目的基因是否_____________，采用分子杂交技术。 (3)检测目的基因是否_____________，采用抗原——抗体杂交。 2．鉴定：除了__________外，还需要进行个体生物学水平的鉴定，如抗虫、抗病鉴定等。 转录出mRNA 翻译成蛋白质 分子检测 核心要点突破 目的基因的获取 1．两种基因文库的主要区别如下