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免疫组织化学：五步 即可获取可供发表的高品质图像 简介 生命科学研究中抗体的发现和使 用对所有疾病领域的诸多进步都 至关重要。在抗体研究中，利用 组织固定特异地鉴别和定量蛋白 推动了临床病理学的进一步发 展。免疫组织化学 (IHC) 是一种 关键的技术，可以用于定义正常 细胞和疾病过程，并有助于发现 疾病治疗的潜在方法。IHC 也是 其他方法的补充。 我们采用高质量的标准开发、制 造并生产出多种工具助力科学探 索。我们开发并验证各种步骤， 帮助科学家取得成果并获得解决 具体实验问题的答案。 尽管利用正确的抗体去靶向抗原 以及放大信号是实现最佳显示的 关键，但IHC 工作流程中的所有 步骤对于获取可供发表的高品质 图像都至关重要。 如需获取出众的IHC 图像，可考 虑使用下列五个步骤： 制备样本——最大程度地减少非 暴露抗原——暴露抗原表位 特异性信号 2 或 降低背景——最大程度地减少非 检测靶点——利用抗体检测靶抗原 观察样本——在显微镜上采集组织 特异性信号 图像 3 第1 步——制备样本 产品要点 该步骤决定了组织结构和用抗体检测抗 原的方法。组织固定的方法取决于组织 • Thermo Scientific™ 旋转组织处理机STP 120 类型和实验要求。当抗原表达水平较高 • Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific™ Signature 时，冷冻切片、丙酮固定的组织是最佳的选择。而 Series™ Pen-Fix™ 固定剂 需要保护细胞形态时，福尔马林固定、石蜡包埋的 • Thermo Scientific™ Superfrost™ Excell™ 显微镜载玻片 (FFPE) 样本则可为您提供最佳结果。不论您是利用 • Thermo Scientific™ Polysine™ 防脱载玻片 冷冻还是石蜡包埋固定组织，我们都可提供试剂和 • Invitrogen™ Image-iT™ 固定/ 破膜试剂盒 多种载玻片供您选择，帮助您制备样本，利用IHC （货号：R37602 ） 实现最佳的蛋白显示。 • Image-iT™ 固定溶液 （货号：FB002 ，R37814 ） 如需了解更多详情，请登录 /ihc5steps 制备冷冻或石蜡包埋的载玻片用于检测和显示。 样品处理步骤建议 问题：无染色或染色弱 可能原因 建议 切片过于陈旧 使用新鲜的切片；如果需要进行保存，保存在4°C 玻片上的组织已干化 重新补充水分并在染色过程中保持组织被覆盖在缓冲液中 不均衡的背景染色可能意味着脱蜡不正常 使用新鲜的二甲苯并延长脱蜡时间 问题：高背景值 可能原因 建议 洗涤不充分；由于固定剂的残留而导致高的背景值 确保在步骤之间用PBS 至少洗3 次 固定不充分；可能会导致抗原在组织中的扩散 降低固定后时间 弥散染色；由组织损伤导致 小心制备组织