第01章 蛋白质的结构与功能.pptVIP

* 免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。 （二）电泳 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。 （一）透析及超滤法 * 透析(dialysis) 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 * 超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。 （四）层析 层析(chromatography)分离蛋白质的原理 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。 蛋白质分离常用的层析方法 * 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。 亲和层析 目 录 目 录 （五）超速离心 * 超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。 *蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关 。 因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。 * 按Fischer投影式：羧基在上方，氨基在左侧的是L型，在右侧的是D型 * * 多肽链几乎完全伸展，两条或多条肽链相互平行排列，在链间形成规则的H键。类型有，平行式和反平行式 * 伸展的肽链呈180°回折，即U形转角结构。由4个连续的aa构成，第一个氨基酸残基的C00H，与第4个aa的-NH2形成H键。 * 钙结合蛋白环中具有亲水侧链，侧链末端的氧原子可通过氢键结合钙离子。锌指结构能与DNA结合。 * 纤连蛋白是细胞外周质的粘附蛋白，各个区域执行与肝素，胶原蛋白等结合的功能。 * 具有四级结构的蛋白在某个亚基单独存在的时候不具有活性。 * 破坏水化膜 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 1、多肽链中aa的顺序决定了肽链的折叠和卷曲方式（牛核糖核酸酶） 2、部分氨基酸残基在蛋白质空间结构中处于关键位置（守恒残基） 如不同来源的胰岛素都是由21个aa构成A链，30个aa构成B链，虽然它们的一级结构并不完全相同，但与其形成空间结构有关的aa残基却完全相同（51个aa中有24个相同），称守恒残基，它们的数量和空间的排列位置也恒定不变。也就决定了胰岛素能够降低血糖的功能。 （二）一级结构与功能的关系 例：镰刀形红细胞贫血 N-val · his · leu · thr · pro · glu · glu · · · · ·C(146) HbS β 肽链 HbA β 肽 链 N-val · his · leu · thr · pro · val · glu · · · · ·C(146) 这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。 1、肌红蛋白与血红蛋白的结构 目 录 （一）、蛋白质的变构作用 二、蛋白质空间结构与功能的关系 Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。 （二）血红蛋白的构象变化与结合氧 肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线 变构效应(allosteric effect) 蛋白质与配体结合后，构象发生改变，从而导致蛋白质的性质和功能发生改变的现象，称为变构效应。 具有变构效应的蛋白称别构蛋白。 引起蛋白质发生变构效应的物质称变构剂。 * 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity) 如果是抑制作用则称为负协同效应