中华鳖Dmrt1基因在雄性性别分化中的功能分析-生物通.PDF

中国科学: 生命科学 2015 年 第45 卷 第9 期: 881 ~ 889 《中国科学 》杂志社 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 中华鳖Dmrt1 基因在雄性性别分化中的功能分析 † † * * 孙伟 , 史思瑞, 蔡晗, 宓猛冬, 钱国英 , 葛楚天 浙江万里学院生物与环境学院, 宁波 315100 † 同等贡献 * 联系人, E-mail: qiangy@; cge@ 收稿日期: 2015-08-19; 接受日期: 2015-08-25; 网络版发表日期: 2015-09-16 国家自然科学基金(批准号:、浙江省自然科学基金(批准号: LY14C190008, LQ13C190001)、浙江省公益性技术应用研究项目(批 准号: 2013C32054)、浙江省农业新品种选育重大专项(批准号: 2012C12907)和宁波市科技创新团队(批准号: 2012B82016)资助项目 doi: 10.1360/N052015-00169 摘要 在大部分脊椎动物中, Dmrt1 基因在雄性性别决定和性腺分化中起重要的调控作用. 关键词 本文通过慢病毒-Dmrt1-shRNA 干扰和Dmrt1-OE 过表达载体系统的构建, 成功实现了Dmrt1 基 Dmrt1 性别分化 因在中华鳖胚胎发育过程中的高效异常表达, 以探讨Dmrt1 在中华鳖雄性性别分化中的功能. 雄性 结果显示, 经过 Dmrt1-shRNA 干扰处理后的 ZZ 胚胎, 32.0%发育成雌性(生理)个体, 而经过 中华鳖 Dmrt1-OE 过表达处理后, 25.5%的ZW 胚胎发育成雄性(生理)个体. 苏木素/伊红(HE)染色、 慢病毒载体 qPCR 和免疫组化分析表明, Dmrt1 基因敲低后, ZZ 胚胎性腺外形和组织结构明显雌性化, 雄性 特异性基因Amh 和Sox9 表达显著降低, 雌性特异性基因Cyp19a1 和Foxl2 表达则显著上升, 出 现雄向雌的性逆转现象; 而Dmrt1 过表达后的ZW 胚胎性腺则向睾丸分化, Amh 和Sox9 表达急 剧上调, Cyp19a1 和Foxl2 表达显著下降, 呈现雌转雄性逆转现象. 上述研究表明, Dmrt1 基因在 中华鳖早期雄性性别形成过程中是必需的, 且它的异位表达能够单独启动雄性分化, 是中华鳖 雄性性别分化的关键因子. 中华鳖(Pelodiscus sinensis)隶属于爬行纲、龟鳖 子机制的解析将是中华鳖全雄苗种培育的一个重要 目、鳖科(Trionychidae)、鳖属(Pelodiscus), 是中国传 前提. 统的名贵优水产养殖品种. 在长期的养殖实践中发 性别决定是一个复杂的、多基因精确调控的过 现雄性中华鳖生长速度快, 裙边宽厚、营养价值高, 程. 解析 GSD 分子机制关键在于挖掘并阐明性别决 且市场单价高于雌鳖. 鉴于此, 如果能养殖全雄鳖, 定的主控基因及其下游关键调控基因的作用机制. 将显著提高养殖的经济效益. 现已发现中华鳖存在 在脊椎动物中, Sry(sex determining region of Y chrom- 微小性染色体(