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抗体是什么 抗体是B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的能与相应抗原特异性结合的糖蛋白,主要存在于血清等体液中,是介导体液免疫的重要效应分子,属于免疫球蛋白。 抗体能与细菌、病毒等病原微生物上的蛋白质、糖蛋白、多糖等物质结合,也能与体内的一些蛋白质结合。 制备抗体的方法 抗体在疾病诊断、免疫防治及其基础研究中有重要作用,因此人们对抗体的需求巨大。 人工制备抗体是大量获得抗体的有效途径 第一代 多克隆抗体 第二代 单克隆抗体 第三代 基因工程抗体 多克隆抗体 一. 概念 给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体。 二. 多克隆抗体的应用 免疫学检测 被动免疫治疗和紧急预防 三.存在问题 特异性差, 用于免疫学检测容易出现交叉反应 由单一克隆杂交瘤细胞产生的,只识别抗原分子某一特定抗原决定簇的特异性抗体。 特点:具有高度均一性,特异性强 杂交瘤细胞: 骨髓瘤细胞 无限增殖; 免疫B细胞 合成、分泌特异性抗体。 小鼠-小鼠 小鼠-大鼠 小鼠-人 人-人 单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题 单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少,缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗,对正常组织有交叉反应 异种抗体反应 鼠源性单抗用于人体,导致异源性超敏反应 基因工程抗体 根据研究者的意图,采用基因工程方法,在基因水平,对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达,产生新型抗体。主要包括 嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。 编码抗体的基因 重链 人 – 鼠嵌合抗体 从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因,与人抗体恒定区基因连接,插入适当表达载体,转染哺乳动物细胞,表达人-鼠嵌合抗体 特点:减少了鼠源性抗体的免疫原性,同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。 人源化抗体 尽管人-鼠嵌合抗体的免疫原性已降低很多,但有时它仍可能引发较强的免疫反应。为了进一步降低抗体的鼠源成分,发展出CDR移植技术。 CDR移植即把鼠抗体的CDR序列移植到人抗体的可变区内,所得到的抗体称CDR移植抗体或改型抗体,也就是人源化抗体。 小分子抗体 用基因工程手段可以制备出与抗原相结合的抗体活性片段,这些片段即称为小分子抗体。 小分子抗体包括: Fab段(包括完整的轻链和Fd 段), ScFv (单链抗体), FV分子, Vh(单区抗体) M.R.U(最小识别单体)。 双特异性抗体 双特异性不同的两个小分子抗体连接在一起可得到双特异性抗体。 双特异性抗体能同时结合两种抗原,因而可介导标记物与靶抗原结合或把某些效应因子定位于靶细胞。在免疫学检测中可简化操作步骤,提高检验质量;应用双特异性抗体介导的药物杀伤效应可用于肿瘤等的治疗。 抗体库技术 用基因克隆技术克隆全套抗体重链和轻链可变区基因,连接到质粒或噬菌体上,然后把需要的基因的重组到特定的原核表达载体中,再转化大肠杆菌以表达有功能的抗体分子片段,并通过亲和筛选获得特异性抗体可变区。 基因工程抗体 生命科学学院 10植丁 贺俊波 免疫球蛋白分的基本结构 可变区 恒定区 单克隆抗体 人―鼠嵌合抗体 人源化抗体 小分子抗体 双特异性抗体 分类: V基因 D基因 编码可变区 J基因 C基因:编码恒定区 轻链 V基因 J基因 C基因(只有一种) 人源化抗体
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