课件：尿路恶性肿瘤尿液中的标记物.ppt

* * * * FDP：膀胱癌细胞产生血管内皮生长因子，增加外周血管的通透性，外渗的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，在纤维蛋白酶作用下分解为FDP（纤维蛋白降解产物）。敏感性和特异性分别为68%、78%。 端粒酶：在生殖细胞和肿瘤细胞中出现，体细胞中不表达，敏感性和特异性分别为74%、79%。 透明质酸和透明质酸酶：二者合用敏感性、特异性达92%、85%。 FCM：敏感性、特异性分别为58%、83%（非整倍体细胞）。 BLCA-4：为核基蛋白的一种，对膀胱癌诊断的敏感性、特异性达96%、100%。 其它标记物：细胞角蛋白、Lewis X抗原、微卫星及表面分子，如M344抗原、19A211、DD23、CD44等。 膀胱癌新的肿瘤标记物---NMP22 膀胱镜检+组织活检：膀胱癌诊断的金标准 缺点：侵入性，不适合大量人口普查，主观影响因素大。 尿细胞学检查：诊断膀胱癌及术后监测复发常用非侵入性检查。缺点：假阴性高、敏感性差。 目前，迫切需要侵入性小，更敏感、更客观的诊断技术。 NMPs(nuclear matrix protein, 核基蛋白）是细胞核的动态骨架，决定细胞核的形态，维持DNA的三维结构，是细胞核的结构单位。 NMP22（NMPs的一种）是尿路上皮特异性肿瘤相关标记物。在BTCC中NMP22因肿瘤细胞凋亡由细胞核释放进入尿中。 NMPs的生物学特性 1974年Berezney和Caffy首次提出NMPs的概念。研究证明：NMPs主要由核纤层蛋白、核孔复合体、核糖蛋白网架结构构成，是细胞核内部框架结构的关键部分。决定胞核的形态，调控有丝分裂过程。在DNA复制，RNA合成，激素的连接，基因表达的调控中起重要作用。 NMPs与肿瘤的关系 NMPs在许多重要的生理活动中起关键作用，许多细胞癌变都伴随着NMP的改变。 许多肿瘤特异性NMPs被发现：Robert(1996)对癌变和正常膀胱组织进行比较后发现了6种存在于癌变组织中的蛋白，而正常组织中无表达，它们是NMPs, BLCA-1~ BLCA6。 Mark(1996）对膀胱癌病人的尿液进行检测后发现一种核基质蛋白NMP22的含量特别高，用NMP22值预测膀胱癌病人术后复发的危险性，有较高的敏感性和特异性。 NMP22的检测 单抗的制备：膀胱癌细胞核------提纯NMP22-----免疫小鼠-----获取单抗（mAB302-22, Mab302-18)----制备酶联免疫反应试剂盒（ELLIS）。 检测：试剂盒（标准品、参照品、检验样品）------与NMP22结合-----洗涤后与标有地高辛的单抗反应------与抗地高辛酶联抗体反应------邻苯二胺显色-----与标准品吸收光度曲线比较。（抗原在尿液中的浓度直接反映于呈色强度） 临界值的确定 David等用尿NMP22值诊断膀胱癌的研究中用6.4u/ml和10.0u/ml作临界值，结果与膀胱镜检和活检对比： 敏感性 特异性 6.4u/ml 68.2% 79.8% 10.0u/ml 48.5% 91.8% Sinan等报道： 敏感性 特异性 6.4u/ml 88% 69% 10.0u/ml 73% 81% 美国FDA进行大量数据统计后，在兼顾敏感性和特异性的基础上确定临界值为10.0u/ml。 NMP22与其它方法的比较 Craig 对330名可疑病人进行尿NMP22测定、尿脱落细胞检查与组织活检对比： 敏感性 特异性 P值 NMP22 100% 85% （临界值10u/ml) 0.001 尿脱落细胞 33% 100% Albert 按分期分级进行了比较： 敏感性（%) NMP22测定 尿脱落细胞检查 Ta