【名称】血清免疫球蛋白A.PDFVIP

【名称】血清免疫球蛋白 A 【英文名】serum immune globulin A 【别名】 【概述】 IgA占血清免疫球蛋白总量 10%～20%，可分为血清型和分泌型。分泌型 IgA是外分泌液(如初乳、唾液、眼泪、肠道分泌液和支气管分泌液)中的主要 免疫球蛋白。因此，其在抗感染防御第一线中起重要作用，尤其在呼吸道和肠 道，可称为 “局部免疫”。 【原理】 (1)单向免疫扩散法：将被检血清做一定倍数的稀释，加入抗体琼脂板的孔 内，让其自由扩散，当抗原抗体比例适当，出现白色沉淀环。其直径与抗原 (IgG、IgA、IgM)浓度的对数成直线关系。查标准曲线，乘以稀释倍数即得免疫 球蛋白的含量。 (2)免疫比浊法： ①透射比浊法：抗原与抗体在比例合适(抗体必须过量)时，形成免疫复合 物(IC)，后者在 PEG等作用下，在液相中形成微粒。当抗体浓度固定时，IC的 量与检样中抗原的量成正比，测其吸光度可间接反映抗原的含量。 ②终点散射比浊法：抗原和相应抗体结合后，经一定时间形成复合物，用 散射比浊仪，测定复合物散射光强度，间接反映抗原含量。 【试剂】 (1)单向免疫扩散法： ①0.12mol/L pH 8.6巴比妥缓冲液。 ②10g/L 0.12mol/L pH 8.6巴比妥琼脂。 ③抗人 IgG、IgA、IgM血清和参考标准血清，生物制品所供应。 ④5ml/L过氧乙酸。 ⑤8cm×14.5cm，厚 3mm的玻璃板或按本单位检验数量设计数块，洗净后干 燥备用。 ⑥“凹”型模板：自制用厚 5mm、长14.5cm，宽8cm 的玻璃丝层压板或电 木制成，呈“凹”型，边宽 1cm，中间部分去掉即成。也可用生物制品所出售 的成品塑料模板。 ⑦打孔器：为金属圆筒，内径 3mm。 ⑧铁夹子或文具夹 1 套 3 只。 (2)免疫比浊法： ①透射比浊法：包括 ：抗血清(要求高效价、高纯度、高亲和力，且不含任 何干扰粒子)；参考品(采用国际参考品或经其标化的参考品)；缓冲液(各仪器 常有指定缓冲液)。 ②终点散射比浊法：免疫比浊仪配有 IgG、IgA、IgM、C 、C
试剂盒 ，内含 稀释液、缓冲液、抗血清等，按说明书配制。 【操作方法】 (1)单向免疫扩散法： ①抗体琼脂板的制备：将“凹”型模板夹于两块玻璃板之间，在玻璃板 左、右、下各用铁夹 1 只夹紧。将上述加热融化的 10g/L 琼脂 装 3 支试管， 每管 14.7ml，然后移入 56℃水浴中，待试管内温度降至 56℃后， 别加入上 述抗人 IgG、IgA、IgM血清(例如其抗血清效价为 1 ∶50，即各管 别加入 0.3ml 抗人 IgG、IgA、IgM血清)，使其最终稀释倍数符合瓶签所标单扩散效 价，混匀后， 别倒入模板内 (要迅速，防止琼脂凝 固)。冷却后，取去上层玻 璃及模板，即得平整均匀 的抗体琼脂板。 ②打孔：取打孔器在抗体琼脂板上相距 15mm(孔中心至孔中心)打孔，用针 头挑去孔内的琼脂，孔边要求圆而规整，无缺损，无毛刺 。有现货供应，可供 选用。 ③参考血清的稀释。 A.取 14支试管并编号 2-15。 B.第2管加入生理盐水 0.1ml，从第 3 管起至第 15管中加生理盐水 0.2ml。 C.取冻干参考血清 1 支(标 0.5ml)，先加蒸馏水 0.5ml 溶解后再加生理 盐水 0.25ml，混匀后 1 ∶1.5倍稀释基础液作第 1 管。 D.从第 1 管中先取 0.3ml 加入第 2 管，再取 0.2ml 加入第 3 管。 E.用0.2ml吸管从第 2 管内吸出 0.2ml 加入第 4 管，混匀后再吸出 0.2ml 加入第 6 管……，以此类推跳管稀释至 14管。另用 0.2ml 吸管从第 3 管内吸出 0.2ml 加入第 5 管，混匀后再吸 0.2ml 加入第 7 管……，以此类推跳管稀释至 15管。如此稀释后各管中参考血清稀释倍数 别为 1.5、2、3、4、6、8、12、 16、24、32、48、64、9