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包裹现象 有些病原微生物自身具有抗吞噬能力（如荚膜等），炎性细胞不能将其吞噬，而是将其包裹起来，形成脓球。 腹腔引流液 （厌氧菌？） 化脓链 隐球菌 涂片镜检的质量控制 显微镜检报告方式 真菌显微镜检报告方式 描述报告真菌镜下的形态（孢子、菌丝），数量。 以我院临床涂片报告为例学习微生物的镜检报告方式 涂片检验的质量控制 应建立涂片检查的室内和室间质控制度。 痰液中常见物质涂片 痰液质量控制 痰液质控原因 直接涂片镜下观察： ??1.白细胞内吞噬细菌与感染相关度高。 ??2.粘液丝缠绕或包裹的细菌可能为目的菌。 ??3.未发现有吞噬现象可结合： ??1）样本类型，样本质量 2）细菌特殊结构形态（荚膜） 3）传统病原菌的毒力强弱 4）菌群改变或异位大量定植等 ?? 来综合考虑受试目标菌 细菌形态学检查技术 微生物室 标本涂片的制备 标本片的制备 制片的玻片应干净。因为灰尘和脂肪可能干扰标本对载玻片的附着和染色的过程。 制片的标本最好是通过选择出来最有可能揭示病原体的那部分。 标本涂片的制备 对于特殊标本（脓液、组织等）应多制备几张涂片，以备做其它染色用。 为了充分鉴定标本，涂片的标本应足够量，但不能过厚。 标本涂片的制备 穿刺液和体液的涂片 依据标本量和可使用的设备可选择几种不同的方法： 1）标本量少 直接取标本涂片 2）标本足量 大于1毫升量的标本进行离心涂片。 革兰染色离心（3000r/min,15mim) 抗酸染色离心（4000r/min,30mim） 细菌、真菌的镜下形态 在显微镜下从那几方面观察细菌？ 细菌的染色性 细菌的形态、排列 细菌的大小 细菌的特殊结构：荚膜、芽孢等 细菌的镜下形态 细菌的形态、排列 球形：双球菌:在一个平面上分裂成双排列。 链球菌：在一个平面上分裂，成链状排列。 四联球菌:在两个相互垂直的平面上分裂，以四个球菌排呈方形。 八迭球菌:在三个互相垂直的平面上分裂，八个菌体重叠呈立方体状。 葡萄球菌 :在几个不规则的平面上分裂，则菌体多堆积在一起，而呈葡 萄状排列。 杆状：大的杆菌如炭疽杆菌。 小的如野兔热杆菌 。 螺旋状：弧菌（Vibrio）菌体只有一个弯曲，呈弧状或逗点状。如霍乱弧菌。 螺菌（Spirillum）菌体有数个弯曲。如鼠咬热螺菌。 细菌的镜下形态 细菌的染色性、大小、形态、排列与下列因素有关 分离物（标本）的来源 细菌的种类 培养基成分：液体、固体 培养物（菌落）的年龄 4～6h培养物的革兰氏染色性好,前后对比其形态相对大。24h后培养物的革兰氏染色性差,形态相对变小,特别是有些菌体轮廓不清晰。 无法使用革兰染色区分阴阳性时，使用拉丝实验。 革兰氏染色 革兰氏染色 革兰氏染色原理 染色液 染色方法 注意事项及影响因素 质量控制 镜检与报告方式 革兰氏染色 原理： ①G+菌细胞壁结构：较致密，肽聚糖层厚，脂质少，酒精不容易透入并可使细胞壁脱水形成一层屏障，阻止结晶紫-碘复合物从胞内渗出。 ? ②G+菌等电点（PI2-3）：比G+菌（PI4-5）低，在相同pH染色环境中，G+菌所带负电荷比G-菌多，故与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不容易脱色。 ? ③G+菌体内有核糖核酸镁盐与多糖复合物，易和结晶紫-碘复合物结合而不易脱色 。 注意事项及影响因素 操作因素： 涂片的厚薄 每一步骤时间的长短 染液因素： 卢戈碘液放置时间过长 95％乙醇挥发 流水 细菌因素： 细菌种类 细菌菌龄 生长环境 注意事项及影响因素 影响因素 过度加热固定（可能使微生物形态发生变化）； 脱色不恰当； 缺乏经验（每次滴加的试剂应将标本完全覆盖）； 革兰染色质量控制 用标准菌株ATCC25922 大肠埃希菌（革兰氏阴性菌）、ATCC25923 金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌）进行革兰染色质控，质控频率为新开瓶和每日一次。 我们可以从涂片中得到的信息 镜下见到典型形态菌体，可直接报告临床，靶向用药时间提前。如：新隐、肺链、芽孢杆菌等，为挽救病人生命争取时间。 重视直接涂片 重视直接涂片 为判断污染菌或致病菌提供依据：如细胞内吞噬等