大豆Lea5基因的克隆与表达分析.PDFVIP

第２６卷第６期 激　光　生　物　学　报 Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．６ 　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　 ２０１７年１２月 ＡＣＴＡ　ＬＡＳＥＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　ＳＩＮＩＣＡ Ｄｅｃ．２０１７ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７７１４６．２０１７．０６．０１３  大豆Ｌｅａ５基因的克隆与表达分析 何道一，周秀杰，张坤亮，夏仁杰 （淮北师范大学，生命科学学院，资源植物生物学安徽省重点实验室，安徽 淮北２３５０００） 摘　要： 为了解高温处理促进大豆幼胚萌发成苗的分子生物学机制，采用经典的基因表达差异显示技术，分析 大豆品种日本晴高温处理的幼胚与对照组材料的差异表达基因。对其中一个差异表达基因Ｋ６进行了测序和 比对分析，结果表明该基因序列与大豆Ｗｉｌｌｉａｍｓ８２基因组中的Ｌｅａ５基因相似度高达９９％，可以确定为Ｌｅａ５基 因。Ｂｌａｓｔｐ比对分析结果表明大豆Ｌｅａ５蛋白为ＬＥＡ３亚家族成员。利用蛋白质分析软件分析了Ｌｅａ５基因推测 的蛋白质结构的特点，结果表明该蛋白质由１１３个氨基酸组成，相对分子量为 １２．２８３ｋＤ，等电点高达 １０．１２。 该蛋白质不形成典型的二级结构。ＲＴＰＣＲ分析表明该基因表达具有组成型特点，在大豆幼胚发育过程中稳定 表达，在大豆的根、胚轴和叶片等器官中均有表达。 关键词： 大豆幼胚；高温处理；差异显示技术；Ｌｅａ５基因；逆转录ＰＣＲ 中图分类号： Ｑ９４６．１ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７７１４６（２０１７）０６０５５００７ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＬｅａ５ＧｅｎｅｉｎＳｏｙｂｅａｎ ＨＥＤａｏｙｉ，ＺＨＯＵＸｉｕｊｉｅ，ＺＨＡＮＧＫｕｎｌｉａｎｇ，ＸＩＡＲｅｎｊｉｅ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＨｕａｉｂｅｉＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＡｎｈｕｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆ ＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕａｉｂｅｉ２３５０００，Ａｎｈｕｉ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｏｙｂｅａｎｙｏｕｎｇｅｍｂｒｙｏｓ ｐｒｏｍｏｔｅｄｂｙｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（ＨＴ），ｂｏｔｈｙｏｕｎｇｅｍｂｒｙｏｓｏｆｓｏｙｂｅａｎｃｕｌｔｉｖａｒ“Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ”ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＨＴａｎｄｗｉｔｈｏｕｔ ＨＴｗｅｒｅｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｓｃｒｅｅｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｅｎｅｓｗｉｔｈｍＲＮＡｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙ ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＤＤＲＴＰＣＲ）．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｒｅｐｏｒｔｅｄＫ６，ｏｎｅｏｆｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｅｎｅｓ．Ｋ６ｗａｓ ｒｅｇａｒｄｅｄ