第四章细化胞破碎.pptVIP

4.3节机械法主要有匀浆法和研磨法。这两种方法中，细胞通过高的机械剪切力被破坏。热量的产生是该法的一个缺点，而且不容易规模放大:如果一种方法可以在实验室规模下操作，我们并不知道这种方法是否在大规模生产中可行。所以，这部分内容仅作为实验的指导，而不是工程分析。 革兰氏阴性细胞结构如图4.1-1 所示。有三层：最外层约8mm厚，酶大多数镶嵌在这层膜上。 革兰氏阳性原核生物缺少最外层结构，但有第二层肽聚糖层和胞浆空间。 第三层为浆膜层或内膜层，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性都有这一结构，该层主要由磷脂组成，还有分散的蛋白质分子和金属离子。 磷脂分子由疏水和亲水基团组成。疏水基团尾部有两烷基基团，亲水基团头部有两性基团，或者说是醇基，在内膜层中，磷脂的尾部聚集在一起，头部暴露在水中，如图4.1-2所示，形成磷脂双分子层。 这三层有不同功能。外层及肽聚糖层使细胞有一定的机械强度；破坏该层是本章讨论的重点。浆膜层和细胞内膜控制细胞的渗透压，即将营养物质运送到细胞内，将代谢物排出胞外。 细胞膜内部包含的物质称为细胞质，它是一种液态的溶液，溶有很多盐、糖、氨基酸和生物聚和物。生物聚和物包括蛋白质、酶、RNA、DNA 。 一些自然生长的细胞中蛋白质都溶解在细胞质中，在一些基因控制细胞中，合成的过量蛋白质在胞浆中沉降。有时细胞壁的目的就是为了获得蛋白质，有时则为了使细胞释放出特殊的酶。 真核细胞，具有真正的细胞核，其结构要比原核生物复杂的多，以图4.1-3中所示的酵母菌为例，和原核细胞一样真核细胞也具有一层细胞膜。 真核生物的细胞膜中含有固醇，而原核生物中没有。除了细胞膜，真核细胞具有一些有特殊作用的细胞器。 每个细胞器也都由一层膜包着与原核细胞的内膜浆膜层比较类似。真核生物的结构复杂并不反映其性质也很复杂。 ※ 4.2 CHEMICAL METHODS 化学方法 表4.0-1介绍了主要的几种化学方法，有渗透冲击法，表面活性剂增溶法、脂溶法。首先简单的介绍一下酶消化法和碱处理法。 酶消化法和碱处理法都是细胞破碎的有效方法，但是也都有各自的缺点。 酶消化法的缺点在于酶的价格昂贵限制了在大规模生产中的使用，虽然条件温和、具有选择性。细胞悬浮液中加入酶能迅速和细胞壁反应并破坏它们。酶选择性的催化细胞壁反应，不破坏细胞内的其它物质。 碱处理法和酶消化法相反，反应激烈，不具选择性，而且较便宜。碱加入细胞悬浮液中后和细胞壁进行了多种反应，包括使磷脂皂化。 该操作是细胞增溶的很好的例子，因为它使细胞壁的成分溶于表面活性剂，也使蛋白质变性。该法不仅破坏了细胞壁也破坏了产物，因此即便很便宜，碱处理也是一种很不常用的方法。 A、 (渗透冲击法) 三种主要细胞破碎化学方法中最简单的是渗透冲击法。此法将一定体积的细胞液加到2倍体积的水中，细胞中溶质浓度高，水不断进入细胞，使细胞膨胀，最后导致破裂。细胞破裂后释放到周围环境中的胞内物可用后面章节介绍的方法分离。 细胞破碎的难易决定于其类型，红血球细胞容易溶破，动物细胞只有当其组织被用4.3节所介绍的方法机械切碎或匀浆后才易溶破。植物细胞很难溶破，因为植物细胞中含有大量的木质成分，通过渗透流很难渗透。 渗透流的动力来自渗透压，渗透压可能很大。可以通过化学平衡来估算，水的化学电势是常数，即： μH20 (outside) = μH20 (inside) (4.2-1) 细胞外纯水的化学电势包括标准化学电势和压力修正项；与之平衡的胞内的化学电势包括三项，即标准化学电势、压力修正相和浓度修正项。对于理想的不可压缩溶液，这些修正相和式（4.2-1）可改写为： μ0 H20+VH2oPout = μ0 H20+VH2oPin+RT ln(1-x1) (4.2-2) μ0H20——标准化学电势 VH2o——水的偏摩尔体积 x1——细胞内所有溶质的总摩尔分数 若包内物为稀溶液，其偏摩尔体积等于纯水的摩尔体积。且x1很小时就有： Pout-Pin=(RT/--VH2o)×ln(1-x1) =(RT/--VH2o) ×(-x1-…) =-RTc1+ … (4.2-3) 该式称为范特苛夫定律。 由该方程知细胞内压力必须小于细胞外压力，否者，水会流入细胞内，溶破细胞。我们可以采用等式4.2-3 估算出渗透压的大小。许多细胞内溶质浓度大约为0.1M NaCl 或0.2M溶质 。 由此可见渗透压必须很大，才导致了细胞的破碎。 B 、 增溶法 第二种是利用表面活性剂的增溶法。最典型的是将体积为细胞体积两倍的某浓度的表面活