相位荧光简介.pptxVIP

相位荧光技术简介; 1852 George Gabriel Stokes renamed the phenomenon “fluorescence” resulted from absorption of light followed by emission 1926 Accurate fluorescence lifetime measurements were first achieved by Enrique Gaviola Time-resolved fluorescence spectroscopy has become an indispensable tool in the study of fast kinetic processes in the subpicosecond to microsecond time scale.; 测量瞬态过程需要用持续时间远小于被测过程特征时间的脉冲激发源，相移法是利用相位变化测量荧光寿命，不同于脉冲法，它要求的仪器相对简单。激发源常采用正弦调制的光源，频率和调制度在一定范围内可调。样品被激发后发出的荧光也是调制光，不过相位和调制度相对于激发光都有了变化。测量这些变化，就可以解析出荧光寿命;1：LED and driver；2：Sample； 3：Spectrometer；4：Photomultiplier tube； 5：Digital oscilloscope；6：Computer;对于单分子发光过程，用??个短脉冲光δ(t)激发样品后，发光强度随时间按指数规律衰减;Relative phase shift and modulation of the excitation and emission light in frequency domain fluorescence spectroscopy.;对于多组分或单一组分拥有多个荧光中心的样品，发光总强度计算如下;对于一个给定的波长λ， 当φD= φ时，光强积分有最大值(in phase) 当φD= φ±90?0该组分的发射被抑制,称为null phase angle 中间范围内的积分值介于两者之间;For a multicomponent, heterogeneous system of j independent emitters, the phase-resolved intensities are additive;用于选择性去除某一物种的光谱，需要已知该物质或相应的标准物质的光谱 对于未知样品，需要调整检测器的相角，0-360度，以消除特定组分的光谱，进而可用于检测多重组分的稳态光谱 但direct nulling方法需调节检测器费时费力，且无法有效区分荧光寿命十分接近的样品 其他使用PRFS来解决多组分样品的方法还有： Indirect Nulling Simultaneous equation method等;几种PRFS方法检测POPOP 和dimethylPOPOP的误差比较;Reference ANALYTICAL CKMISTFIY, VOL. 56. NO. 13, NOVEMBER 1984 ANALYTICAL CHEMISTRY, VOL. 57, NO. 8, JULY 1985 Photochem. Photobiol. Sci., 2008, 7, 1301–1312 荧光寿命的正弦调制测量法及分析 2007