抗生素类药物边的分析.pptVIP

三、【杂质检查】--液相色谱 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以磷酸盐溶液-乙腈（40：60）为流动相； 波长为215nm。 按红霉素C、红霉素A、红霉素B的顺序出峰。 另取红霉素标准品适量，130℃加热破坏4小时，液相色谱分析。 记录色谱图至红霉素A保留时间的5倍。按红霉素C、红霉素A、杂质1、红霉素B、红霉素烯醇醚峰的顺序出峰。杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5.0%）。 四、含量测定—液相色谱 分别加甲醇溶解，用磷酸盐缓冲盐（pH7.0）-甲醇（15︰1）定量稀释制成溶液，分别作为供试品溶液和标准品溶液；精密量取供试品溶液与标准品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中红霉素A的含量。药典规定：按无水物计算，不得少于88.0%。 氨基糖苷类抗生素 一、概述 二、化学结构 三、理化性质 四、鉴别试验 五、杂质检查 六、含量测定 一、概述 代表药物： 链霉素、卡那霉素、庆大霉素、巴龙霉素、硫酸奈替米星等 制备方法： 微生物发酵或半合成 抗菌谱 ：G-菌和结核杆菌感染的首选药 抗菌机理： 抑制蛋白质的合成 不良反应： 耳毒性、可透过胎盘屏障 结构特点 ：氨基醇-氧桥-氨基糖→氨基糖苷 二、化学结构 链霉素 庆大霉素 三、理化性质 溶解性与碱性： 碱性、水溶性抗生素 旋光性： 含有多个氨基糖具有旋光性 紫外吸收光谱： 链霉素在230nm有吸收,其它均无. 苷的水解与稳定性： 含有二糖胺结构的抗生素过酸或过碱条件下易水解失效。 四、鉴别试验 方法：茚三酮反应、Molish试验、N-甲基葡萄糖氨反应、麦 芽酚反应、坂口反应、硫酸盐反应、色谱法、光谱法等 【实例】硫酸核糖霉素-薄层色谱 取硫酸核糖霉素与其标准品适量，分别加水制成每1ml含核糖霉素10mg的溶液，取上述两种溶液等量混合，作为混合溶液吸取上述两种溶液各2μl, 分别点于同一G薄层板上，用展开剂展开，晾干，喷以0.2%茚三酮水饱和正丁醇溶液，110。C加热10分钟。混合溶液所显示斑点应为单一斑点，供试品所显示斑点的应与对照品溶液或混合溶液主斑点的颜色和位置相同 五、杂质检查 1、无菌检查（硫酸链霉素） 取本品与0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml中含供试品2万单位的供试液，经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液分次冲洗，（每膜不少800ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌按药典附录的无菌检查法操作。另取装量10ml的0.5%葡萄糖肉汤培养基6管，分别加入每1ml中含2万单位的溶液0.25～0.5ml，3管在30～35℃培养，另3管在20～25℃培养，应符合规定。 2、硫酸盐检查 容量法 色谱法 3、有关物质检查 来源：菌种代谢产物或半合成时的中间体 方法：色谱法 薄层色谱（主要） 六、含量测定 1、微生物检定法 优点：成本低、适于推广使用 缺点：影响因素复杂、操作费时，且测定的是总效价，不能分别测定主成分和相关组分或有关物质的含量。 2、免疫法（体内药物监测） 3、色谱法 薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱法 4、光谱法 5、高效毛细管电泳法-质谱法 其它：、核磁共振法、旋光法、量热法等 微生物法 概念:通过检测抗生素对微生物的抑制作用，来计算抗生素活性的方法 分类：管碟法和浊度法 管碟法：利用抗生素在琼脂培养基的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小来测定供试品效价 浊度法：利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小比较标准品与供试品对细菌生长的抑制程度以测定供试品效价 操作：《中国药典》 衍生化法：利用氨基糖苷类抗生素结构中的活泼基团（氨基、羰基）与衍生化试剂形成紫外光区有吸收或有荧光的物质，以便于紫外检测或荧光检测。 柱前衍生反相HPLC 非衍生化法：HPLC-ELSD（蒸发光散射检测法） 【实例】： HPLC-ELSD法测定核糖霉素的含量 实验条件：色谱柱：Agela Technologies Venusil ASB-C1815nm(250mm 4.6mm, 5μm)； 流动相：0.11mol/L七氟丁酸酐混合溶液；流速：0.8mL/min； 采用蒸发光散射检测器漂移管温度：110℃，雾化气体流速：3.0L/min。测定方法：精密取核糖霉素对照品，分别加水溶解并定量稀释制成约含核糖霉素0.13、0.17和0.20mg/mL的溶液，作为对照品溶液(1)、(2)和(3)。精密量取上述3种溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图