分子缝合针DNA连接酶.ppt

定向基因改造设想 限制性内切酶 1.特点：特异性，即识别特定核苷酸 序列，在特定的切点切割。 2.分布：主要在微生物中。 3.结果：产生黏性末端（碱基互补配 对）、平末端。 4.举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A 之间切开形成黏性末端，SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。 “分子缝合针”——DNA连接酶 根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类： 1.从大肠杆菌中分离得到：E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接。 2.从T4噬菌体中分离到： T4连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。 “分子运输车” ——运载体 1.作用： 2.条件： 3.种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 4.质粒的特点: 质粒的特点: 细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子； 质粒的存在对宿主细胞无影响； 3.质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 * * 1.1 DNA重组技术 的基本工具 专题1 基因工程 The camelecow 设想一 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 设想二 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？ 设想三 经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。 基因工程产品 抗虫害的玉米 转鱼抗寒基因的番茄 转基因鲑鱼 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 高产、稳产 优良品质 抗逆性强. 基因工程产品优点: 什么叫基因工程？ 也叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对有关DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，从而创造出人类所需要的新的生物类型和基因产物。定向改造生物的遗传性状。 （一）基因工程的概念 （一）基因工程的概念 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的原理 生物体外 基因 DNA分子水平 基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 人类需要的新的生物类型 基因重组 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 抗虫棉(有毒蛋白) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 重组DNA 导入 形成 基因工程培育抗虫棉 的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 形成重组DNA 关键步骤三： 重组DNA导入受体(棉花)细胞 基因工程培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ （二）DNA重组技术的基本工具 关键步骤 一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 分子手术刀—限制性内切酶 分子缝合针—DNA连接酶 分子运输车—运载体 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶（简称限制酶） （二）DNA重组技术的基本工具 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 “分子手术刀”——限制性核酸内切酶作用结果 （二）DNA重组技术的基本工具 限制酶 什么叫黏性末端？ （二）DNA重组技术的基本工具 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考 “分子缝合针”——DNA连接酶 （二）DNA重组技术的基本工具 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，是把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子才能形成。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C