转基因动物技术优缺点比较.ppt

Retrieval of Blastocysts Injection of ES cells into blastocysts 优点： 外源基因整合情况的可控性高。 可预先在细胞水平检测外源基因的拷贝数、 定位、表达的水平及插入的稳定性。 外源基因导入ES细胞的方法多样，细胞鉴定 及筛选方便。 缺点： ES细胞系建立及培养困难 维持ES细胞的未分化及多向分化潜能不易 所得个体为嵌合体 目前，胚胎干细胞介导法在小鼠上应用比较成熟，在大动物上应用较晚。 将目的基因重组到逆转录病毒载体上，制成高滴度病毒颗粒，人为感染着床前后的胚胎（也可直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层培养细胞共同培养以达到感染目的), 获得转基因动物的方法。　　 3、逆转录病毒感染法 优点： 受精卵携带外源基因的阳性率高 外源基因多单拷贝整合 操作简单，避免注射法对卵子的损害 宿主范围广 可同时感染大量胚胎，感染率及胚胎存活率高 缺点： 容纳大小有限 重组逆转录病毒的长末端容易甲基化，影响 外源基因的表达 方式　 显微注射法　　　 逆转录病毒法 DNA长度 ＜50kb, ＜10-15kb, 与时相 单细胞卵 4-6细胞卵 移卵部位　 输卵管　　　　　　 子宫 整合方式　随机，多拷贝　　　随机，单拷贝 表达　　　受宿主旁侧 　受LTR影响 的DNA影响 易缺失 传代　 　　可以　　　　　　 有时不可以 子代嵌合体机率高 4、体细胞核移植法 将外源基因导入到体细胞中，再将该细胞进行培养，选择其中带有外源基因的细胞进行扩增，用这种细胞的细胞核进行核移植（把体细胞核植入一个去了核的卵母细胞中，融合并激活），将重组胚进行体外培养或者植入同步化的假孕动物的输卵管。 在理论上应该全部为阳性转基因动物，而且外源基因的整合率可达100%。 1997年，英国：克隆羊Dolly 1999年, 中国：陈大元 利用兔的卵母细胞获得种间核移植的大熊猫胚胎 2000年，美国：转基因牛 优点： 对体细胞进行基因改造后，用于核移植可以 提高转基因的效率，不仅具有“ES细胞途径” 的全部优点，且物种适用面广，无需经过嵌合 体育种就可获得纯合个体，周期短，效率高。 缺点： 技术上难度， 成功率极低， 胚胎死亡率高， 非一般实验室可以开展。 5、精子载体法 直接以精子为载体的转基因方法。 将成熟精子与外源ＤＮＡ共培养，成熟精子 与外源DNA预培养之后，使精子有能力携带 外源DNA进入卵子中，使之受精，并使外源DNA 整合到染色体中。　 目前国际上只有1例成功模型，国内 也很少有相关报道，精子载体法很少被应用。 6、ＹＡＣ法 利用酵母人工染色体(ＹＡＣ)作为载体 制作转基因动物的方法。 酵母人工染色体（ＹＡＣ）载体是近年来 发展起来的新型载体, 能克隆百万对碱基 的大片段ＤＮＡ。 　　　　　　 　 优点： 　　　保证大片段ＤＮＡ的完整性 。　 保证较长外源片段在转基因动物研究中的 整合率提高 。　 保证了目的基因上下游的侧翼序列的完整性， 因而可以消除或减弱基因整合后的位置效应。 因此ＹＡＣ介导法制备转基因动物具有广阔的应用前景。 　除上述几种常用的转基因方法外，人们为了适应于一些特殊需要也探索了一些其他的方法。例如诱变技术(P265)等，这些方法都不太成熟，其应用也正被人们验证。 （四）、 注射后卵（胚胎的移植） 注射后单细胞至桑椹胚的卵移植到受孕后0?5天的假孕