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实验03 植物组织中还原糖含量的测定 (斐林试剂比色法);
脱色的程度与溶液中还原性糖含量成正比关系。在590nm波长下比色测定吸光度,根据吸光度的减少值查标准曲线,即可计算出所测样品中还原糖的含量。; 材料:新鲜植物叶片 仪器设备:分光光度计、分析天平、低速离心机、水浴锅等 试剂:1. 斐林试剂A液:40g CuSO4·5H2O溶解于蒸馏水定容至1.0L。2. 斐林试剂B液:200g酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·5H2O)与150g NaOH溶于蒸馏水中,并定容至1.0L。 A、B两液分别贮存,使用前按1:1体积混合。 (已配好); 0.1%葡萄糖标准液
烘干的纯葡萄糖100.00mg,加蒸馏水溶解定容至100ml
浓度:1.00 mg / ml
(已配好);三、实验方法与步骤;处理方法:
加斐林试剂后摇匀,加盖
沸水浴中15min,??然冷却
转入离心管,平衡后放入离心机!!
离心:2500 r/min 5min
小心取出,取上清液测吸光值;标准曲线绘制:
以葡萄糖量(mg)为横座标,吸光度差值(ΔA590 )为纵座标,在座标纸上绘制出标准曲线。; 3.0~4.0g样品 —→加水研磨成匀浆后转入50ml大试管 —→80℃水浴20min(间歇震荡) —→冷却后转入100ml容量瓶定容、过滤后得到待测溶液。
取待测液6.0ml进行测定(按制作标准曲线的步骤)。;W= g ;VT= 100 ml ; Vs= 6 ml ;
A590 及ΔA590 填入工作曲线表
作式作曲线图
由工作曲线查得 样品的还原糖含量为C= ? mg
;样品还原糖的含量(%)=
;2种温度水浴处理,不可弄混
离心机使用注意安全。
思考:比较双缩脲试剂与斐林试剂的差异?
思考:比较本实验与蛋白质测定实验中的化学原理差异?
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