重组人源性胶原蛋白的制备及表征.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 侯增淼 等/重组人源性胶原蛋白的制备及表征 319 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Feb. 25, 2019, 35(2): 319−326 DOI: 10.13345/j.cjb.180266 ©2019 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法· 侯增淼，李晓颖，李敏，杨金芳，杨小琳，赵金礼 陕西慧康生物科技有限责任公司，陕西 西安 710054 侯增淼, 李晓颖, 李敏, 等. 重组人源性胶原蛋白的制备及表征. 生物工程学报, 2019, 35(2): 319–326. Hou ZM, Li XY, Li M, et al. Preparation and characterization of recombinant human-source collagen. Chin J Biotech, 2019, 35(2): 319–326. 摘 要: 为了获得可实现工业化生产的重组人源性胶原蛋白，根据人I 型胶原蛋白Gly-X-Y 序列，优选亲水性的 Gly-X-Y 胶原肽段设计人源性胶原蛋白氨基酸序列及对应的核苷酸序列，利用酶切技术构建pPIC9K-COL 表达载体， 电转化毕赤酵母获得人源性胶原蛋白毕赤酵母工程菌，并对其进行发酵罐发酵、纯化及鉴定。结果显示，获得表达 量达4.5 g/L ，纯度大于95%的人源性胶原蛋白，经氨基酸N 端测序、分子量测定、氨基酸分析及胶原酶降解试验， 确定获得的蛋白与理论的人源性胶原蛋白一级结构一致；同时胶原经冷冻干燥后进行扫描电镜分析及细胞毒性试 验，确定人源性胶原蛋白冻干品具有多孔纤维网状结构及优良的细胞相容性，预示其具备作为生物医学材料的潜质。 : 胶原蛋白，人源性，毕赤酵母，生物材料 Preparation and characterization of recombinant human-source collagen Zengmiao Hou, Xiaoying Li, Min Li, Jinfang Yang, Xiaolin Yang, and Jinli Zhao Shaanxi HuiKang Bio-Tech Co Ltd., Xi ’an 710054, Shaanxi, China Abstract: This study aimed to obtain a recombinant human-source collagen for industrialization. First, based on the Gly-X-Y sequence of human type I collagen, we optimized the hydrophilic Gly-X-Y collagen peptide, designed the human collagen amino acid sequence and the corresponding nucleotide sequence. Next, the expression vector pPIC9K-COL was constructed via endonuclease digestion technology. We obtained an engineering strain of human-source collagen by electrotransforming Pichia pastoris , and then it