GB478940阪崎肠杆菌检验.pptVIP

* hncdc * hncdc * hncdc * hncdc * hncdc * hncdc * hncdc * hncdc * hncdc * hncdc 四、PIF中ES的来源及中毒发生的原因 目前公共卫生关注的PIF中ES的来源包括以下2种情况： 内在污染 ——二次污染。 如：加工环境中微生物的存在；加工装置内表面微生物的存在；热处理后，与干燥基粉混合的加入成分中存在的微生物。 外源性污染——配方粉调制环境和调制器皿。 受ES污染的配方粉或调制配方在较高温度下存放，食用前不加热，或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致ES有机会生长繁殖，增加患病的危险性。 * PIF中ES的安全性问题，已成为全球关注的焦点。 2002年ICMSF把ES列为“严重危害特殊人群，威胁生命、导致慢性实质性后遗症或长期影响”的一种病原菌。 2004年2月FAO/WHO在日内瓦召开的PIF中ES专家研讨会：ES列为PIF中仅有的两种A类致病菌（沙门和阪崎）之一。 * 第三部分 食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 本标准修改采用 ISO/TS 22964 （ 1st edition 2006-02-01 ）Milk and milk products — Detection of Enterobacter sakazakii FDA July 2002; Revised August 2002 Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula * 第一法：阪崎肠杆菌的检验第二法：阪崎肠杆菌的计数 * 第一法 阪崎肠杆菌的检验 * 阪崎肠杆菌检验程序 报 告 生化鉴定 挑取黄色菌落 DFI琼脂 36℃±1℃，24 h±2h 挑取蓝绿色菌落 1mL + mLST-Vm 10mL 44℃±0.5℃，24 h±2h 检样 100 g/mL+稀释液 900 mL 36℃±1℃，18 h±2h 前增菌 选择性增菌 选择性分离 生化鉴定 TSA 25℃±1℃，48 h±4h 5.1 前增菌和增菌 BPW（合适时可选择无菌水） 左图：未混合； 右图：混合后。 * mLST-Vm mLST-Vm，即在大肠菌群增菌肉汤LST中另加入适量的NaCl和Vm 。 研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙门菌属、大肠埃希氏菌等）相比，ES具有较高的耐渗透压能力。加入0.5 M 的NaCl在保证ES良好生长的同时，可以有效地抑制上述其他细菌的生长。 Vm可有效地抑制G+菌的生长。而较高的生长温度可以进一步抑制其他细菌的生长。 * 5.2 分离 显色培养基的基本原理相似，二者都是根据ES能产生α-葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc产生有色菌落。 * 显色培养基对ES的选择性较好，ES形成的特征性菌落易于辨认，以DFI为例： 硫化氢指示剂可以区分ES和产生少量α-葡萄糖苷酶但H2S阳性菌株（如普通变形杆菌）。 ES都可以在该平板上生长并产生蓝绿色菌落 其他常见菌在DFI平板的菌落颜色 白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希氏菌、泛菌属的多种菌等 黄色菌落：赫氏埃希氏菌 黑褐色、粉色或中心蓝绿菌落：少量菌种 ESIA:蓝色，1-3mm 国产显色培养基 * 36℃±1℃ 24 h±2h * 黄色素 TSA： 25℃培养后 典型ES：黄色 阴性对照E. coli ATCC 25922：白色菌落 * 5.3 鉴定（生化反应） * 商业生化鉴定系统的应用 推荐使用的ES生化鉴定方法有很多，主要有API 20E，ID 32E，Biolog GN2 MicroPlate，VITEK GNI+等。 上述方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用。 在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的是API 20E和Vitek GNI+。 * API 20E生化鉴定板典型生化反应图示 * 质量控制 选择近期分离的阪崎肠杆菌阳性菌株或标准菌株作为阳性对照，检测增菌液和分离培养基对阪崎肠杆菌生长的影响和生化鉴定结果，对整个实验的操作过程进行质量控制。 * 阪崎肠杆菌检测方法的比较 2005年从10个省（市）的零售或批发市场采集的194份配方粉。FDA定性检测检出4个阳性样本，本定性检测检出5个，其中4个在第一法的检测中均为阳性，另一阳性检出样品在第一法中的检测结果为阴性。 *“粉紫色、圆形、光滑、凸起、饱满”。 * 选择性分离平板上分离株的菌落特征和样品数量 VRBGA DFI 菌落特征 样品数量