课件：酶工程制药.ppt

* * * * * * * * 二、模拟酶的分类（按属性分） （了解内容） 1.主-客体酶模型 最具代表性的是环糊精（CD），是一种优良的模拟酶。可提供一个疏水的结合部位并能与一些无机和有机分子形成包结络合物，以此影响和催化一些反应。 环糊精的疏水区处于空 穴的内侧，亲水区处 分子的外侧，与酶分子 的微环境十分相似。 空穴本身疏水，能从水 溶液中抽提有机分子， 并将其束缚到空穴中， 这种现象类似于酶将底 物束缚到酶的空穴中。 环糊精对束缚的分子有 选择性，被束缚的分子 要空穴中与之“契合”。 2.胶束模拟酶 近几年比较活跃的领域之一。 胶束在水溶液中提供了疏水微环境（类似于酶的结合部位），可对底物束缚，如果将催化基团如咪唑基、羟基等连接到胶束上，就可以提供“活性中心”部位，使胶束成为具有酶活力的胶束模拟酶。 3.肽酶 模拟天然酶活性部位而人工合成的具有催化活性的多肽。 4.半合成酶 以天然酶为母体，用化学或基因工程的方法引进适当的活性部位或催化基团。 5.印迹酶 分子印迹：指制备对某一特定化合物具有选择性的 聚合物的过程，这个特定化合物叫印迹分子。 原理：生物体特异的分子识别功能。 思考题 一、名词解释 人工模拟酶 分子印迹 第五节 酶的化学修饰一、 什么是酶化学修饰？ 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。即：在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团（物质），特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构和性质。 酶化学修饰的意义 提高酶的活力； 增强酶的稳定性； 降低或消除酶的抗原性； 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 二、酶分子的修饰方法 大分子修饰 酶的表面化学修饰 小分子修饰 交联修饰 固定化修饰 非催化活性基团的修饰 蛋白主链的修饰 酶分子内部修饰 催化活性基团的修饰 辅助因子的修饰 肽链伸展的修饰 结合定点突变的修饰 1.酶的表面化学修饰 （1）大分子修饰 可溶性大分子通过共价键连接在酶分子表面，形成覆盖层。 应用最广泛的是：PEG类修饰，分子量为500-20000。 （2）小分子修饰 利用分子化合物对酶的活性部位或活性部位之外外的侧链基团进行化学修饰，以改变酶学性质。 广泛使用的小分子化合物有：氨基葡萄糖、乙酸酐、硬脂酸等。 （3）交联修饰 使用双功能试剂，如戊二醛、PEG等将酶蛋白分子之间、亚基之间或分子内不同肽链部分间进行共价交联，可提供其稳定性，增加其在水溶液中的使用价值。 （4）固定化修饰 通过酶表面的酸性或碱性残基，将酶共价连接到惰性载体上后，由于酶所处的微环境改变，会使酶的性质发生改变。 2.酶分子内部修饰 （1）非催化活性基团的修饰 最经常修饰的残基可以是亲核的，也可以是亲电的，或 是可氧化的。修饰后酶的催化动力学性质发生改变。 （2）蛋白主链的修饰(肽链有限水解修饰) 利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构及 其空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能的 方法。 蛋白主链修饰主要靠酶法。 如：将猪胰岛素转变成人胰岛素。 （3）催化活性基团的修饰 对催化活性基团可以通过选择性修饰侧链成分来实现氨基酸的取代。 （4）辅助因子的修饰 有以下三个方面 ①不是共价结合的辅助因子，可将辅助因子共价结合到酶上；引入新的或修饰过的辅助因子； ②将新的辅酶引入结构已经清楚的蛋白质上； ③金属酶中金属离子的取代。 现在常用的氨基酸置换修饰的方法是定点突变技术。 定点突变是20世纪80年代发展起来的一种基因操作技术。是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术。是蛋白质工程和酶分子组成单位置换修饰中常用的技术。定点突变技术，为氨基酸或核苷酸的置换修饰提供了先进、可靠、行之有效的手段。 3. 结合定点突变的化学修饰 三、 酶修饰后的性质变化 1.热稳定性：一般来说，热稳定性有较大的提高。 2.各类失活因子的抵抗力：修饰酶对蛋白酶、抑制剂均有一定的抵抗能力，从而提高其稳定性。 3.抗原性：比较公认的是PEG和人血清白蛋白在消除酶的抗原性上效果比较明显。 4.半衰期：一般在体内的半衰期得到有效延长。由于酶分子经修饰后，增强对热、蛋白酶、抑制剂等的稳定性，从而延长了在体内的半衰期。 5.最适pH：大部分酶经化学修饰后，酶的最适