课件：抗体工程制药.ppt

所以双特异性抗体与既往肿瘤免疫治疗相比,除了能特异性识别肿瘤细胞外,还能将循环血液中的免疫效应细胞再导向至肿瘤细胞处,从而使效应细胞的抗肿瘤活性增强,发挥免疫导向作用,这是肿瘤治疗的新突破。 从广义讲应属于双功能抗体范畴。 （1）配基—配基型融合蛋白，如 CD4-Fcγ. （2）配基—Ig型嵌合抗体，如 IL-2-Ig （3）配基—FV型嵌合蛋白，如 CD4-FVCD3 (4) 受体—FV型融合蛋白 （5）酶—抗体型融合蛋白（abeneyme,抗体酶） 19.3.5、抗体融合蛋白 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * 他用血清来治疗白喉，这种儿童常见的疾病。这种病通过空气经过呼吸道传播，多发病，死亡率高。贝林将白喉杆菌的培养物用三氯化碘来减弱其毒性，他将这种弱毒的培养物注射给豚鼠，使豚鼠产生免疫力，这种免疫力就存在于豚鼠的血清里。这种血清可以保护受白喉杆菌感染的大白鼠。1891一名医生第一次给一个白喉患儿注射了这种血清，结构救活这个病人。该疗法很快得到了广泛的应用，使白喉的死亡率从48%降到了13%。由于贝林的成果的社会效益非常显著，诺贝尔基金会理所当然地选择贝林做为首个获奖者。而贝林在获奖后也别具慧眼地开办了一家血清厂，用马匹这样的大动物来生产抗毒素血清，满足了社会需要，而他也成为将医学成果产业化的一个先例。1913年贝林将毒素的抗毒素混合给儿童注射，使儿童获得了抗白喉的自动免疫力。 * * * * 杂交瘤细胞的克隆化 克隆化：使单个细胞通过无性繁殖而获得该细胞群体的整个培养过程，这种群体细胞的生物学特性和功能完全相同 原因：筛选出的阳性克隆中，大多数情况下产生抗体的杂交瘤集落不是来自单个细胞，其中可能混有不分泌抗体的细胞，这种细胞比分泌抗体的细胞生长快，容易占据优势；此外，刚融合的杂交瘤细胞不稳定，染色体易丢失 一般融合后的杂交瘤细胞要经过三次左右的的克隆化，才能达到100%孔内均为抗体阳性细胞克隆 克隆化方法 —— 有限稀释法 将杂交瘤细胞悬液稀释至一定浓度，加入到96孔培养板中，使每个孔中的细胞尽可能为单细胞，经过一段时间培养最终形成细胞克隆 可在光学显微镜下观察到细胞分裂，直至细胞集落形成 克隆化方法 —— 软琼脂培养法 将一定浓度的待克隆细胞与2%琼脂糖培养液混合，铺于底部含有1%琼脂糖培养液平皿的上部，待单细胞集落生长至1～2 mm时，用毛细管吸取单集落，转移到细胞培养板中培养 工作效率高，一次克隆化即可获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞，但对操作熟练程度要求高 杂交瘤细胞库的建立 第一次融合的细胞在每次克隆过程中，均应对检测阳性的细胞扩大培养，冻存一定量的细胞 经3～4次克隆，100%杂交瘤细胞孔为分泌抗体阳性细胞时，扩大培养，冻存较大量的细胞，建立较完整的原始细胞库 原始细胞库中的细胞应包括原始融合细胞、每次克隆的细胞及建株的细胞，且建株细胞的溯源应明确 原始细胞库中的建株细胞经扩大培养，再建立一个工作细胞库，用于日常研究和生产 可获得10μg/ml的抗体。多采用RPMI 1640培养液，添加10%~20%胎牛或小牛血清。但由于培养液中含有血清成分，总蛋白量可达100μg/ml以上，给纯化带来困难。加入小牛血清又是发生支原体污染的原因，而且批间质量差异太大，直接影响杂交瘤细胞的生长。 改良的方法有：无血清培养法、悬浮培养法、微载体悬浮培养法。 无血清培养法：利用白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺等混合物代替小牛血清。此法虽可减少污染，但产量不高。 悬浮培养法：连续悬浮培养的细胞密度可2*107/ml, 收集的单克隆抗体可达400 μg/ml。如在培养液中加入微载体，细胞密度可达108。 19.2.2杂交瘤细胞的培养工艺 （1）体外培养法： 基本程序：接种前1~2周，小鼠腹腔注射0.5ml Pristane（降植烷）或用液体石蜡，然后注射1*106杂交瘤细胞，7~12d便有腹水生成，待生成腹水后再提取，离心去细胞沉淀，取上清液冻存。 优点：操作简便，比较经济，所得单克隆抗体量多且效价高，还可有效地保存杂交瘤细胞株和分离已污染杂菌的杂交瘤细胞株。 缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白，给纯化带来难度。 （2）动物体内诱生法 可获得10μm/ml的抗体。常用方法。 腹腔注射法 19.2.3 单克隆抗体的纯化工艺 凝胶过滤 用于IgG和IgM类McAb的分离纯化，常用Sephadex G 200为分离介质 抗体回收率50～80%，纯度可达95%以上，