课件：JL第四章酶.ppt

a--非调节酶 b--正协同别构酶 的S形曲线 别构酶的动力学曲线 ATCase的结构及其催化链的别构过度作用 无催化活性构象(T-型) C C C C C C R R R R R R 有催化活性构象(R-型) C C C C C C R R R R R R ATP（正效应剂） CTP（负效应剂） 别构酶的序变模型 S S S S S S S S S S S S S S 亚基全部处于R型 亚基全部处于T型 依次序变化 别构酶的齐变模型 S S S S S S S S S S T状态（对称亚基） T状态（对称亚基） S S S S 对称亚基 对称亚基 齐步变化 酶的多种分子形式——同工酶 概念：存在于同一种属或不同种属，同一个体的不同组织或同一组织、同一细胞，具有不同分子形式但却能催化相同的化学反应的一组酶，称之为同工酶（isoenzyme） 类别：原级同工酶；次级同工酶 实例：乳酸脱氢酶 研究意义：作为遗传的标志；作为临床诊断指标；研究某些代谢调节机制 乳酸脱氢酶同工酶形成示意图 多肽 亚基 mRNA 四聚体 结构基因 a b 乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱 + – H4 MH3 M2H2 M3H M4 点样线 不同组织中LDH同工酶的电泳图谱 LDH1(H4) LDH2(H3M) LDH3(H2M2) LDH4(HM3) LDH5(M4) 心肌 肾 肝 骨骼肌 血清 - + 原点 酶 原 的 激 活 在体内处于无活性状态的酶前身物（酶原，zymogen）在一定条件下被修饰转变成有活性的酶的过程称酶原的激活。其实质是酶原被修饰时形成了正确的分子构象和活性中心，由此可见酶分子的特定结构和酶的活性中心的形成是酶分子具有催化活性的基本保证。 实例：胰蛋白酶原的激活 胰蛋白酶原 胰蛋白酶 六肽 肠激酶 活性中心 胰蛋白酶原的激活示意图 第六节 酶工程简介 一、化学酶工程 ?天然酶 ?固定化酶 ?化学修饰酶 ?人工模拟酶 二、生物酶工程 ?克隆酶 ?突变酶 ?新酶 将酶学和工程学相结合，产生了酶工程(enzyme engineering)这样一个新的领域。酶工程主要研究酶的生产、纯化、固定化技术、酶分子结构的修饰和改造以及在工农业、医药卫生和理论研究等方面的应用。 固定化酶 将水溶性酶用物理或化学方法处理，固定于高分子支持物(或载体)上而成为不溶于水，但仍有酶活性的一种酶制剂形式，称固定化酶(immobilized enzyme)。 包埋法 吸附法 共价偶联法 交联法 溴化氰亚氨碳酸基偶联法 OH OH BrCN H2O O O C=N-E O-CO-NH-E OH O-C-NH-E NH OH H2N-E （多羟基载体） O-CONH2 OH （惰性） O O C=NH （活泼） O—C —N OH 戊二醛交联法 OHC(CH2)3CHO 戊二醛 H2N-E N -HC=N-E-N=CH（CH2）3-CH=N- E- N CH CH 酶的改造和模拟 酶的改造：功能基团的化学修饰酶 酶蛋白侧链的化学修饰 酶分子内或间的交联反应 酶的模拟：根据酶作用的原理摸拟酶的活性中心和催化机理，用化学方法制备结构较简单,高效、高选择性、稳定性能好的新型催化剂,可以是无机化合物、有机化合物或小肽。 人工模拟酶?-benzyme 环糊精 催化侧链 催化侧链连接到环糊精上，可模拟胰凝乳蛋白酶 环糊精分子结构 环糊精结构模型 生物酶工程示意图 酶的蛋白质结构功能 新酶分子蓝图 选择性修饰方案 突变酶 新酶 克隆酶 产品 效用 发展 酶基因 遗传设计 遗传修饰 DNA重组技术 DNA重组技术 问答题 1、影响酶促反应的因素有哪些？它们是如何影响的？ 2、试比较酶的竞争性抑制作用与非竞争性抑制作用的异同。 3、什么是米氏方程，米氏常数Km的意义是什么？试求酶反应速度达到最大反应速度的99％时，所需求的底物浓度（用Km表示） 4、什麽是同工酶？为什麽可以用电泳法对同工酶进行分离？同工酶在科学研究和实践中有何应用？ 5、举例说明酶的结构和功能之间的相互关系。 6、称取25毫克某蛋白酶制剂配成25毫升溶液，取出1毫升该酶液以酪蛋白为底物,用Folin-酚比色法测定酶活力,得知每小时产生1500微克酪氨酸。另取2毫升酶液，用凯式定氮