脓汁和粪便标本中病原菌的检测-2..ppt

自然界中的微生物 已经发现的微生物超过13万5千种，被认为非常危险的有600种，在人间传染的病原微生物380种。它们存在于地球的各个角落，从寒冷的极地到炎热的赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,均有它们的踪迹 。 空气、水、土壤、人体的体表以及与外界相通的腔道，均有不同种类和数量的微生物存在。 存在于人体消化道的细菌超过800种，数量可达100万亿（1014），菌体重量1～1.5公斤。 医学微生物学实验综合性实验三 P38  Comprehensive Experiment 3 空气与人体体表细菌学检查 空气的细菌学检查P38 手指皮肤的细菌学检查P41 空气的细菌学检查 暴露法（Exposure Method) 手指皮肤的细菌学检查P41 在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受到污染的机会也最多。一只外观比较“干净 ”的手，可携带10万个细菌、200多种病毒。因此，经手传播的疾病很多，范围很广，包括肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手传播的疾病。 常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法，常不易去除。 暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通常是暂住菌。 常规的洗手方法（甲和丙操作） 将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。 反复搓揉双手，搓揉时间不应少于 30秒。 用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。 ※能有效地去除大多数手上的暂住菌。 医学微生物学教学实验室标准洗手方法（乙和丁操作） 用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。 分别搓擦10～15次。 保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。 医学微生物学实验综合性实验一(P2) 脓汁和粪便标本中病原菌的检测(二） 细菌的分离与培养P7 ※目的要求：掌握分离、纯化微生物的基本操作技术。 平板划线分离法 Streak Plate Method 借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。 ※Colony：在固体培养基表面或基内，由单个细菌在局部位置不断增值，形成肉眼可见的细菌集团，称为单菌落。 ※Colony Forming Units:由单个或聚集成团的多个菌体，在固体培养基上生长繁殖，形成一个肉眼可见的细菌集落，称为菌落形成单位。 ※Lawn:在固体培养基表面，由许多菌落融合在一起形成一片密集的的细菌群落,称为菌苔。 小组分工 甲→脓汁标本→营养琼脂平板(nutrient agar plate) 乙→脓汁标本→营养琼脂平板(nutrient agar plate） 丙→粪便标本→伊红美蓝平板(eosin methylene blue plate） 丁→粪便标本→伊红美蓝平板(EMB plate） 接种环烧灼灭菌 Flame Loop 使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可，接种环3～5秒钟冷却 。 使用后，先在火焰背面将把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。 金属杆快速通过火焰2～3次，杀灭表面微生物。 酒精灯无菌操作区 生物安全警告 接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快，＜50um在0.4s内扩散开，＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 三级生物安全防护 思考题 为何取链球菌作为空气的卫生指标之一? 为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌? 为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略了有什么危害? 做细菌培养时，平板为什么要倒置? 培养细菌的常用方法有哪些? 从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项? 实验内容 空气的细菌学检查P38 营养琼脂平板(黄色,1组1个） 手指皮肤的细菌学检查P41 营养琼脂平板(黄色,2人1个 → 划分8格） 平板划线分离法P8 甲→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 乙→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 丙→粪便标本→伊红美蓝平板(紫色） 丁→粪便标本→伊红美蓝平板(紫色） * * 器材准备 浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒棉球1瓶，酒精棉球 1瓶，眼科镊子2把；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板5个。 空气的细菌学检查 空气是人类赖以生存的环境之一，也是重要的疾病传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，