国标法检测食品中大肠菌群赛项规程.doc

“国标法检测食品中大肠菌群”赛项规程 一、比赛内容与说明 1、比赛内容 根据食品微生物检测的常规检测项目和社会关注热点，选择具有代表性的检测项目“国标法检测食品中大肠菌群”作为操作考核内容，在国标中有两种法—大肠菌群MPN计数法和大肠菌群平板计数法，根据本次大赛的指导思想和比赛原则，同时考虑到比赛项目的可操作性，本次大赛选择“大肠菌群MPN计数法”作为比赛项目。检验程序及操作技术依照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》（GB 4789.3-2016）进行考核评判。 本项目主要考察学生在食品微生物学检验实施过程中所涉及的样品稀释液的制备、样品的接种、无菌操作、发酵结果的判断及数据处理等环节的基本操作技能，以及在整个实验过程中的操作文明和操作安全意识。 比赛内容具体分为两个环节，第一环节为初发酵试验，主要包括采样、制备样品稀释液、样液接种；第二环节为复发酵试验，包括初发酵结果观察判断、转接种、复发酵结果观察、出具检验报告。 2、比赛说明 本赛项由一名选手独立完成整个操作过程，并要求参赛选手在0.5个小时内完成初发酵试验(15分种)和复发酵试验(15分钟)的各步操作内容，如超时，将按超出时间的长短酌情扣分。另外参赛选手还应明确一点，比赛过程中用到的初发酵管、初发酵结果、复发酵管、复发酵结果及MPN检索表均由工作人员事先准备好，参赛选手只要按照比赛内容里规定项目依据国标要求完成各步操作。 二、评分办法和评分标准 1、评分办法 本项比赛评分严格按照公平、公正、公开的原则。比赛成绩按照百分制计分。 比赛成绩的评定完全依照赛前制定的技术文件中的主要考核内容及评分标准，根据选手实际操作表现，由现场裁判组进行客观评判、计分。有关现场操作考核内容及评分标准另见文件中相关标题。 在比赛过程中，参赛选手如有不服从裁判判决、扰乱赛场秩序、舞弊等不文明行为，由裁判长按照规定扣减相应分数，情节严重的取消比赛资格，比赛成绩记0分。 2、主要考核内容和评分标准 表1 主要考核内容及评分标准 项目 考核内容 分值 评分细则 扣分 主要扣分点记录 得分 样品的稀释 （35分） 称取25 g 样品,放入盛有225 mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。样品匀液的pH 值应在6.5～7.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。 5 称量（称取方法、无菌操作） 5 拍击式均质器的使用（方法、操作熟练程度） 5 进行pH 值测试 用1 mL 无菌吸管吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL生理盐水的无菌试管中，振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。 5 吸管使用(打开方式、取液、调节液面、放液) 5 稀释样品（顺序、混匀、换管） 4 试管操作（开塞、管口灭菌、持法、盖塞） 2 酒精灯无菌区操作 4 操作熟练程度 初发酵 试验 （15分） 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL 5 3个稀释度的选择 5 接种（发酵管的数量、接种量） 5 从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不超过15 min 36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h 0 根据已准备好的初发酵管样品判定结果，记录在报告单上，此处在原始记录及报告处进行评分 复发酵试验 （20分） 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中 10 接种环的使用（持法、灼烧灭菌、冷却、取培养物、灼烧多余培养物） 5 产气管的选择 5 酒精灯无菌区操作 36 ℃±1℃培养48 h 0 根据已准备好的复发酵管样品判定结果，记录在报告单上，此处在原始记录及报告处进行评分 原始 记录及报告(20 分) 观察现象与记录一致、清楚、无涂改 10 观察现象的记录 征得评委同意,每改1次扣0.5分 按复发酵确证的大肠菌群BGLB阳性管数，检索MPN表，报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。报告结果规范、正确、无涂改 10 结果的报告 每改1次，扣1分 文明操作（10分） 实验后台面整理干净、物品归位、器皿无破损 5 物品的整理归位 5 器皿的破损情况 完成 时间 (30min) 共用（　　　　　）分钟 开始：　　　　　 结束：　　　　　 0 提前，不加分不扣分 按时，不加分不扣分 超时：每超1分钟，扣1分（最多扣10分） 合 计 评审专家签字：