细胞因子与细胞黏附因子的测定.docVIP

最新各类医学考试课程联系Q第十六章　细胞因子与细胞黏附因子的测定 　　细胞因子是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。　　细胞黏附分子是介导细胞间及细胞与细胞外基质间黏附作用的分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞膜表面表达和可溶性两种形式存在。　　二者分别在机体的免疫调节、炎症应答、创伤修复、肿瘤转移等生理和病理过程中发挥重要作用。 　　细胞因子或细胞黏附分子的检测，不仅有助于临床疾病的诊断、预后判断和疗效观察，而且被视为评估机体免疫状态的重要方面。　　目前，检测细胞因子和细胞黏附分子的方法主要有生物学测定法和免疫学测定法。 第一节　生物学测定方法 　　常见的生物学测定法包括：　　基于DNA检测的分子生物学测定法：细胞因子或细胞黏附分子DNA扩增法、RNA印迹法、原位杂交法、核酸酶保护分析等，可定性或定量分析细胞因子和细胞黏附分子的基因或mRNA。　　生物活性测定法：根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测方法，主要用于细胞因子的测定。　　有助于细胞因子检测的活性作用大致有以下几类：①刺激细胞增殖或集落形成的活性；②维持细胞生长和存活的特性；③抑制细胞生长或破坏细胞的效应；④促进细胞趋化或抗病毒作用等。 　　一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法　　目前检测指示细胞增殖的方法大致有以下三类：①直接计数法；②细胞代谢活性测定方法；③细胞代谢产物测定法：包括代谢产物荧光强度测定法（如ATP法和CAMP法）和指示细胞表面标记或可溶性分子测定法。上述方法中常用3H-TdR、125I-UdR掺入法（放射性核素掺入法）和MTT比色法，前者敏感性髙、结果客观；后者则可在全自动酶标仪上自动化检测，且无放射性污染，更为常用，但敏感性不如放射性核素掺入法。　　（一）放射性核素掺入法：通过细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。该法的优点是结果客观，可常规用于大标本量的测定，但方法的特异性受依赖细胞株依赖程度的影响。此外，测定过程中需要使用放射性核素，废物的处理较繁琐。　　（二）MTT比色法：不使用放射性核素，以细胞代谢变化作为增殖指征来检测细胞因子生物活性的测定方法。 　　二、细胞毒活性测定法　　对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细胞共育将会导致细胞死亡。待测细胞因子做一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量与细胞因子的活性成正比。如TNF杀伤肿瘤细胞的测定。 　　三、抗病毒活性测定法　　抗病毒活性测定法主要用于IFN等细胞因子的检测。 　　四、趋化活性测定法　　具有趋化活性的细胞因子，也称趋化因子，诸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等，能诱导中性粒细胞、单核-巨噬细胞或淋巴细胞等定向迁移。其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。趋化性是诱导细胞由趋化因子低浓度处向趋化因子高浓度处做定向移动的特性，可采用琼脂糖和Boyden盲端微孔小室趋化试验测定。化学增活性则指细胞因子增强细胞随机运动能力的特性，可采用琼脂糖小滴化学动力学试验测定。　　某些细胞因子（如IL-1）的活性可通过刺激特定细胞分泌的代谢产物而间接反映，据此建立的测定方法，称为细胞因子诱导产物测定法。通过测定所诱生产物的水平，了解待测细胞因子活性强度。例如，IL-1可诱导胸腺细胞分泌IL-2，IL-2的水平可间接反映IL-1的活性；IL-12/18诱导IFN-γ，IL-6/8诱导IL-17等，也可分别用类似的方法检测IL-18和IL-6/8水平。细胞因子诱导产物测定法，是目前测定IL-1最常用的方法。 　　五、生物学活性测定方法学评价　　用于细胞因子生物学活性测定，对细胞因子前体或其降解产物、与可溶性受体结合的细胞因子、细胞因子聚合物等，均不能用此法检测。细胞因子受体拮抗物、细胞因子的天然抗体和类细胞因子等，也将干扰细胞因子活性的测定。　　细胞因子生物学活性测定法主要具有以下特点：①敏感性较高；②特异性不高；③操作繁琐；④易受干扰。 第二节　免疫测定方法 　　细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的免疫原性，可刺激机体产生相应的抗体，这构成了免疫测定法的重要基础。重组细胞因子的问世，使细胞因子的获得更为方便，也更便于制备特异性抗血清或单克隆抗体。获得针对某一细胞因子的特异性抗体（包括多克隆抗体或单克隆抗体），采用免疫测定法进行检测。 　　一、ELISA方法　　ELISA法是细胞因子首选检测法，可作定性或定量分析。双抗体夹心法是用于细胞因子测定的最常用方法，该法使用的抗体可以是针对同一抗原的多克隆抗体，也可以是针对同一抗原的不同抗原表位的单克隆抗体。　　细胞因子测定的标本主要包括