无菌实验室的管理要求.docVIP

无菌实验室的管理要求 食品微生物实验室的无菌间应制定质量管理标准，并设专人负责无菌间的定期环境监测工作。对无菌室的管理可遵循以下的原则： 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作人员进入无菌室应关掉紫外灯； 人员进入无菌室要穿无菌衣、帽、口罩和专用鞋，非工作人员不得随意进入； 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液等。 无菌室内配备紫外灯进行空气消毒，应定期用适宜的消毒液（70%酒精或0.2%新洁尔灭）灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。每日进行湿式小扫除，每周进行大扫除，每月进行空气和实验台表面的细菌学检测，各项指标控制在最低标准，符合无菌室的技术要求。 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应用适宜的方法灭菌。 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉消毒外表面。 无菌间内应保持清洁。操作完毕，应及时清理无菌室，用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。再用紫外灯辐照灭菌。需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～36℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～36℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 无菌操作基本技术及要求 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%的酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。 每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%的酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 .无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%的酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘的非无菌区域操作。 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少ClassII)。操作过程中，应避免引起气溶胶类物质的产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。 使用无菌瓶内的溶液时，不可将无菌敷料堵塞瓶口倾倒无菌溶液，或直接伸入溶液瓶内蘸取，以免污染剩余的溶液。 无菌包内物品不慎污染或无菌包浸湿，外界微生物可渗入包内，造成污染，需重新消毒。 戴手套时应注意未戴手套的手不可触及手套外面，而戴手套的手则不可触及未戴手套的手或另一手套的里面。戴手套后如发现破裂，应立即更换。脱手套时，须将手套口翻转胶下，不可用力强拉手套边缘或手指部分，以免损坏。 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30