酵母核来糖核酸的分离.pptVIP

实验6 酵母核糖核酸的分离 及组分鉴定;一、实验目的 ;二、实验原理 ;稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。浓盐法是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。;RNA含有核糖、嘌呤碱/嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解，从水解液中可用定糖，加钼酸铵沉淀（或用定磷法）和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。（1）嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物沉淀。（2）地衣酚显色法：核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与地衣酚（3，5-二羟基甲苯）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂。（3）磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷??酸铵沉淀[(NH4)3PO4·12MoO3↓]。 ; 三、仪器、原料和试剂 ; 三、仪器、原料和试剂 ;四、实验步骤 ;2．RNA组分鉴定 水解RNA：取0.5~1g提取的核酸，加入10%硫酸10mL沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。 （1）嘌呤碱：取一支试管，加入1mL水解液， 加入过量浓氨水（约2mL）。然后加入1mL 0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。 （2）核糖：取一支试管，加入水解液1mL，三氯化铁浓盐酸溶液2mL和地衣酚乙醇溶液0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。 （3）磷酸：取一支试管，加入2mL水解液，然后加入5滴硝酸银和1mL钼酸铵溶液后，在沸水浴中加热，观察有无黄色磷钼酸铵沉淀。;五、计算 ;六、注意事项;七、思考题