课件：免疫测定方法学和临床应用.pptVIP

目前我国多采用第三代抗-HCV ELISA试剂,其敏感性超过99%,虽然目前缺乏判断其敏感性的金标准,但对于免疫功能正常的HCV RNA阳性感染者,抗-HCV检出率也高于99%。 丙肝病毒抗体 补充/确认实验:重组免疫印迹 (RIBA) 检测原理：以待测血清中的HCV抗体和分别固定在硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、尼龙膜等载体上的不同HCV抗原之间的特异性结合反应为基础,测定待测样品中抗-HCV的存在和有无。 丙肝病毒抗体 因为HCV的各种抗原分别被单独固化在载体的不同位置上,因此,该项检测可以区分待测样品对HCV不同抗原的不同反应。 目前RIBA HCV已经得到FDA的认可,成为抗-HCV确认的标准。 临床意义：RIBA阳性的患者中75-80%为病毒血症(HCV RNA);RIBA阳性而血清中没有HCV RNA时提示可能为既往感染。 丙肝病毒抗体 实时荧光监测PCR 检测原理：在PCR扩增反应管内加入了标记有两种染料的针对靶序列的探针,每当一次扩增反应中一条探针与靶序列退火结合后,整个反应体系就会增加一个单位的荧光.从而得出每一次扩增循环结束后产物的量. 丙肝病毒抗体 临床意义： 特异性强：抗-HCV阳性并不能代表现症感染,丙型肝炎的诊断标准是HCV-RNA. 敏感性高：可发现抗-HCV阴性者HCV感染. 阳性出现早：在“窗口期”没有抗-HCV产生,但可检测出RNA. 可指导用药：为疗效观察及预后判断提供指标. 丙肝病毒抗体 与HBV DNA相比，HCV RNA检测更为复杂和困难,检出率低: 血清中病毒含量低,且有一定波动,呈间歇阳性; 易被RNA酶降解; HCV RNA受进食的影响,HCV易与血中脂质及脂蛋白结合,致使其检出率降低; 二次PCR,其中任何步骤的问题均易影响其检出。 丙肝病毒抗体 应用EIA S/CO比值报告抗-HCV结果 试剂 Ortho 3.0 华大吉比爱 金伟凯 华美 科化 英科新创 万泰 S/CO比值 ≥ 3.8 ≥ 7.0 ≥ 10.0 ≥ 6.0 ≥ 10.0 ≥ 8.6 ≥ 10.0 阳性预测值 ≥ 96.1% ≥ 96.1% ≥ 96.1% ≥ 97.3% ≥ 96.0% ≥ 96.1% ≥ 96.0% 任芙蓉,等. 中华肝脏病杂志, 2005,13:255-258 丙肝病毒抗体 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 抗-HCV筛查检测 报告 阴性 或 根据S/Co比值判定为阳性 所有阳性结果 高S/Co比值阳性* 报告 低S/Co比值阳性* RIBA HCV检测 或 阳 性 报告 阴 性 报告 不 确 定 报告 阳性 阴 性 RIBA HCV检测 HCV RNA的检测 阳 性 报告 阴 性 报告 不 确 定 报告 报告 *以S/Co 3.8 (OCD HCV ELISA 3.0) 或 8.0 (OCD VITROS ECi/ECiQ HCV)为“界值”。 CDC抗-HCV实验室检测结果报告导则 丙肝病毒抗体 ANA ENA 测定 目前临床应用检测自身抗体的主要免疫学试验技术种类有：间接免疫荧光法（indirect immune fluorescence, IIF）、直接免疫荧光法(IF)、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹技术、乳胶颗粒凝集、免疫扩散、免疫电泳、放射免疫检验和酶免疫细胞化学等。其中，IIF法、免疫印迹法和ELISA法被广泛用于临床检测直接抗细胞成份和可溶性细胞成份抗体的检测。有时为了弥补试验技术或试剂中可能存在的缺陷以及试验条件的影响，提高试验结果的特异性和敏感性，也用一种方法检测多种自身抗体，或一种自身抗体用多种试验方法检测 。 ANA.ENA-Abs 欧蒙斑点法(EuROAssAY) 实验原理 · 将膜条上平行包被数种纯化的、已鉴定生化特性的抗原线作为固相。 象固定生物薄片一样将膜条固定在载片的反应区。 · 若是阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与固相上的抗原结合。 · 第二步，碱性磷酸酶(AP)标记的抗人抗体与已结合的抗体反应。 · 第三步，加入可产生颜色反应的色原／底物溶液温育。若标本中含有待测的特异性抗体，相应的抗原条带将呈现较深的颜色。 ANA.ENA-Abs 结果判断简单，可靠 · 不需特殊仪器，肉眼判断结果 · 由于把抗原包被在固定的位置判断实验结果比免疫印迹法简单，更适合常规检测 · 反应区的质控带呈显较深的颜色反应说明操作正确。 · 阴阳性结果差别明显。条带显色的深浅与抗体滴度相关。 · 抗原经亲和层析分离纯化。膜条上没