基于肺微血管内皮细胞而非肺上皮细胞途径阻断.PDF

中华危重病急救医学  2019年1月第31卷第 1期  Chin Crit Care Med，January   2019，Vol.31，No.1 · 37  · ·论著 · 基于肺微血管内皮细胞而非肺上皮细胞途径阻断  PD-L1表达可以减轻小鼠的间接急性肺损伤                 ，   200120 ： ， ： Email xxssmm9511028@163.com 【 】 摘要 目的  探讨程序性死亡配体-1（PD-L1）在肺微血管内皮细胞或肺上皮细胞的表达及其在小鼠间 接急性肺损伤（i-ALI）模型中的作用及机制。方法  将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为两部分（均n ＝40），  分别观察不同给药途径对PD-L1表达的影响。每部分小鼠按照随机数字表法分为假手术（Sham）组、i-ALI组、  i-ALI + 小干扰RNA（siRNA）随机序列对照组及i-ALI + 含可特异性抑制PD-L1表达碱基对的siRNA（PD-L1   siRNA）组，每组 10只。采用失血性休克联合盲肠结扎穿孔术（CLP）“二次打击”诱导i-ALI模型；Sham组 仅结扎双侧股动脉，不予置管及放血，且仅分离盲肠但不结扎穿孔。i-ALI+PD-L1 siRNA组于小鼠休克复 苏2 h后分别经尾静脉或气道内给予PD-L1 siRNA阻断肺微血管内皮细胞或肺上皮细胞PD-L1的表达； i-ALI+siRNA随机序列对照组给予无抑制PD-L1表达效应的siRNA随机序列；Sham组和i-ALI组给予 100 μL  磷酸盐缓冲液（PBS）。CLP术后24 h处死小鼠，收集外周血、肺组织及支气管肺泡灌洗液（BALF），用流式细 胞仪检测PD-L1蛋白表达，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血、肺组织以及BALF 中的细胞因子和 趋化因子水平，定量检测血浆和BALF 中蛋白浓度及肺组织中髓过氧化物酶（MPO）活性，光镜下观察肺组 织病理学改变。结果  ① 与Sham组相比，i-ALI组肺微血管内皮细胞或肺上皮细胞PD-L1的表达均明显 升高〔肺内皮细胞：（27.88±1.53）% 比（19.64±1.03）%，肺上皮细胞：（58.70±8.21）% 比（29.23±3.94）%， 均P ＜0.05〕。② 经尾静脉给予PD-L1 siRNA可以抑制肺微血管内皮细胞PD-L1的表达〔与i-ALI组比较： （21.37±0.76）% 比（27.88±1.53）%，P ＜0.05〕；经气道内给予PD-L1 siRNA主要抑制肺上皮细胞PD-L1的表 达〔与i-ALI组比较：（31.23±4.71）% 比（58.70±8.21）%，P ＜0.05〕。给予siRNA随机序列对i-ALI小鼠肺 微血管内皮细胞或肺上皮细胞PD-L1的表达均无影响。③ 经尾静脉给予PD-L1 siRNA抑制肺微血管内皮细 -3 -3 胞PD-L1的表达后，BALF/血浆的蛋白比值较i-ALI组显著降低〔（4.48±0.35）×10 比（6.11±0.56）×10 ，  -1 -1 P ＜0.05〕；肺组织MPO活性亦较i-ALI组显著降低（U·μg ·min ：2.48±0.47 比4.56±0.52，P ＜0.05）；肺组织 或血浆中白细胞介素-6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）等炎性因子水平较i-ALI组显著降低〔肺组织（ng/g）：IL-6为177.4±23.2 比287.9±57.3，MCP-1为 839.6±91.7 比1 395.7±211.9，MIP-2为923.7±107.3 比1 700.9±240.2；血浆（ng/L）：IL-6为950.2±192.7 比 1 828.2±243.6，TNF-α为258.7±29.1 比443.0±58.1，MCP-1为2 583.8±302.3 比4 328.1±416.4，MIP