应用指引29-02446AA核酸样品制备.PDF

GE Healthcare Life Sciences 应用指南29-0245-46 AA 核酸样品制备 illustra™ Ready-To-Go™ GenomiPhi™ V3 与illustra GenomiPhi V2 DNA 扩增试剂盒的性能比较 摘要 室温稳定的illustra Ready-To-Go GenomiPhi V3 DNA 扩增试剂盒用于全基因组扩增 （WGA ），该新型版本增加产量、简化产品 处理和保存、提高一致性和减少污染的风 险。为了进行性能比较分析，我们使用 Ready-To-Go GenomiPhi V3 和GenomiPhi V2 DNA 扩增试剂盒扩增了人基因组 DNA （gDNA ）。结果显示，Ready-To-Go GenomiPhi V3 产生比GenomiPhi V2 DNA 扩 增试剂盒更高的产量。我们使用来自这两种 图1. Ready-To-Go 形式为要求严格的应用提供重现 试剂盒的WGA 产物进行下游应用，例如末 性好的可靠性能，例如全基因组测序、基因分型和 芯片CGH 。 端PCR 和STR 分析。 材料与方法 介绍 GenomiPhi 扩增 GenomiPhi 使用Phi29 DNA 聚合酶和随机六 使用的人gDNA (10 ng)和Lambda DNA (10 聚体引物用于等温WGA 。GenomiPhi 扩增反 应能够从纳克量的起始材料生成微克量的 ng)是通过这两种 GenomiPhi 试剂盒的标准 高分子量DNA。Phi29 DNA 聚合酶具有校对 方法进行扩增纯化的。（表1 和 2）。使用 3’–5’核酸外切酶活性，因此保证了 DNA 复 Quant-IT™ PicoGreen™ dsDNA 定量试剂定 制期间的高保真度（1,2 ）。我们设计了 量来自每个扩增反应的 DNA 产量。而且每 Ready-To-Go GenomiPhi V3 DNA 扩增试剂 隔 30 分钟采集样品，并用 PicoGreen 检测 盒（图 1），以 Ready-To-Go 形式为你提供 法定量，以监测整个推荐的 90 分钟孵育时 简化的工作流程和长期的室温稳定性。这些 间和更长时间的扩增产量。 改进的结果是，Ready-To-Go GenomiPhi V3 在 WGA 反 应中 优 于 Ready-To-Go GenomiPhi V2 DNA 扩增试剂盒。 1 29-0245-46 AA 应用指南29-0245-46 AA 核酸样品制备 表1. GenomiPhi V2 DNA 扩增试剂盒的标准操作步 STR 基因分型 骤概述 进行基因分型以评估 Ready-To-Go GenomiPhi V2 DNA 扩增试剂盒 GenomiPhi V3 和GenomiPhi V2 DNA 扩增试 从冰箱取出并在冰上解冻 剂盒所生成的 DNA 的质量和纯度。对于每 DNA (10 ng) 1 μl 个样品，使用AmpFLSTR™ Identifiler™ PCR 样品缓冲液 9 μl 扩增试剂盒，根据厂家的操作步骤研究总共 加热到95℃ 3 分钟，在冰上冷却到