苍白芽孢杆菌D-阿拉伯糖异构酶克隆表达及D-塔格糖制备-食品科学.PDF

※生物工程 食品科学 2013, Vol.34, No.09 121 D 苍白芽孢杆菌 -阿拉伯糖异构酶克隆表达及 D-塔格糖制备 张 娥，张 梁，石贵阳* (江南大学生物工程学院，工业生物技术教育部重点实验室，粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，江苏 无锡 214 122) 摘  要 D- D- D- D- ：目的：利用筛选出的一株能产 阿拉伯糖异构酶( AI) 的耐热菌株，将 半乳糖转化为 塔格糖。方法： 从实验室保藏的菌株中筛选出一个产D- 阿拉伯糖异构酶能力较强的苍白芽孢杆菌，将该菌株中的D- 阿拉伯糖异构 酶基因D-AI 克隆到载体pET-28a上，并转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) 中表达。通过SDS分析发现，重组菌株能 表达出大量可溶性蛋白。结果：D- 阿拉伯糖异构酶纯化酶的最适反应pH值和温度分别是7.0和60 ℃，在pH6.0～8.0 范围和30～70 ℃范围内具有较好的稳定性。加入Mn2+ 、Zn2+ 、Fe2+ 、Ca2+和Ba2+均能够使D-塔格糖的转化率提高，而 Mg2+ 2+ D- 2+ 和Cu 则对酶活力产生不同程度的抑制。结果表明：底物质量浓度为18g/L 的 半乳糖(含5mmol/L Mn )，加入 到pH值为7.0 的重组细胞粗酶液中，在60 ℃条件下反应12h ，可达到最高转化率为4 1.6% 。结论：这表明具有生物活 D-AI E.coli D- 性的重组 在大肠杆菌 (BL21) 中成功表达且具备工业化生产 塔格糖的潜能。 D- D- 关键词：苍白芽孢杆菌； 阿拉伯糖异构酶； 塔格糖；表达；转化 Cloning and Expression of D-Arabinose Isomerase from Geobacillus pallidus and Its Application in D-Tagatose Conversion ZHANG E ，ZHANG Liang，SHI Gui-yang* (Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214 122, China) Abstract D D AI D D ：A new recombinant -arabinose isomerase ( - )