DNA的损伤与修复.pptVIP

§ 5.4 损伤跨越 损伤跨越（damage bypass）：DNA复制过 程中发生的损伤，无法修复时，在暂 时保留损伤的情况下，继续复制，复 制结束后再进行修复，由于这一机制 是事先合成错误率较高的DNA，再对 其进行修复，故也可被称作易错修复。 特点：保留损伤，先复制，再修复。 5.4.1 重组跨越 重组跨越(recombinational bypass)又称为重组修复(recombination repair），其基本机制是通过对 DNA模板的交换，跨越模板链上的损伤部位，在新合成的链上恢复正常的核苷酸序列。重组跨越虽然没有消除模板链上损伤，但也没有在复制过程中扩大损伤。模板链上的损伤可以在复制完成后，用其它途径进行修复。 E.coli重组跨越的两种机制： 第一种： 在新链合成遇到损伤部位时，通过蛋白质RecA, RecF, RecO和 RecR的作用，使复制叉后退，两条新合成的链回折，形成互补双链。接着，因模板链上的损伤而中断合成的新链，以另一条新链为模板，在DNA pol I的催化下进行链的延伸，随后，复制叉向前移动，跨越损伤部位，进行正常的复制。如图5—17 第二种：一旦复制叉到达损伤位点如嘧啶二聚体，或模板链断裂，DNA pol 即停止移动并与模板链解离，另一条模板链在RecA, RecF, RecO和 RecR的作用下断裂，并与受损伤的模板链形成互补双链，在跨越损伤部位后继续合成新链，然后在RuvA, RuvB和 RuvC的作用下，链的交叉部位迁移，在断裂的模板链上留下的一段缺口，由DNA pol I和连接酶修补。其后，DNA复制可按正常机制完成。这一机制形成链交叉，以及交叉点的迁移，是十分复杂的过程。如图5-17 5.4.2 合成跨越 合成跨越（bypass synthesis):在模板链遇到损伤部位，负责复制的DNA pol (原核细胞是DNA pol Ⅲ，真核细胞是聚核酶δ或ε)停滞不前的情况下，用可以进行跨膜合成的DNA pol取代复制酶，在损伤部位的互补位置上随机插入(正确的或错误的) 核苷酸，合成错配率较高的DNA ，再用其他机制进行修复。 （1）大肠杆菌的跨越合成 SOS反应：指细胞受到潜在致死性压力，为了生存所启动的一系列生理生化反应。包括易错的DNA跨越合成，细胞丝状化（细胞伸长但不分裂），和切除修复系统的激活，其中涉及到近20个sos基因的表达，整个反应受到阻遏蛋白LexA和激活蛋白RecA的调节。 E.coli的跨越合成是其SOS反应的一部分，属于一种可诱导的过程。E.coli在正常的生存条件下，LexA蛋白与20个sos基因上游的一段被称为SOS盒（SOS box）的操纵基因（其一致序列为5-CTG-10bp-CAG-3）结合，阻止这些基因的表达。在细胞面临致死性压力，其DNA遭到严重损伤而出现单链缺口的情况下，RecA蛋白被单链DNA激活，使LexA蛋白发生自我切割，解除了其对sos基因表达的抑制。 其中20个sos基因中，跨越合成有关的是dinB, umuC和umuD，它们的表达产物分别是DNA pol IV, UmuC和UmuD。其中的UmuD被LexA的切割形成UmuD，1分子UmuC与2分子UmuD可组装成DNA pol V。 （如图5-18所示） RecA蛋白可以形成螺旋状多聚体，并与损伤区的DNA单链结合，促使DNA pol III的核心酶和γ滑动钳装载复合物脱离复制叉，DNA pol V随即取代DNA pol III结合到复制叉上，在损伤部位的互补位置上随机插入核苷酸，以克服损伤对DNA复制造成的阻碍。复制完成后，已经被SOS反应激活的切除修复系统被用来修复DNA的损伤。在细胞内的DNA损伤被修复后，RecA失活，不再促进LexA的自我切割。含量增高的LexA与SOS盒结合，关闭SOS反应。如图5—19 （2）真核细胞的跨越合成 真核细胞的跨越合成有两种方式，一种是无错途径，另一种是易错途。 无错途径：其典型例子即对T—T二聚体地跨越合成，基本过程为DNA pol η 替代DNA pol δ或ε进行跨损伤合成，在嘧啶二聚体的对应位置插入两个正确的A。 易错途径：其典型例子即出芽酵母的DNA pol δ和Revl蛋白参与的跨越合成，在DNA的损伤部位，DNA pol ε和Revl蛋白代替停留在复制叉上的DNA pol δ或ε，Revl在损伤部位的对应位置插入第一个核苷酸，从而启动跨越合成。随后，由DNA pol ε合成的几个核苷酸。最后，再由DNA pol δ或ε取代DNA po