立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应检测方法-中华流行病学杂志.PDF

· · 526 ·实验研究· 立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应 检测方法的建立 牛东升 陈梅玲 温博海 李青凤 邱玲 张晶波 【摘要】 目的 采用TaqMan—MGB探针建立立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应(PcR) 检测方法。方法依据立氏立克次体外膜蛋白B基因序列设计引物和探针，以克隆的om声B基因片 段为DNA模板，在ABI7900型荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量PCR检测方法。结果建 立的定量标准曲线c￡值与模板拷贝数呈线性关系(R。=0．996)，最低检测浓度为5拷贝／弘1；用荧光 定量PcR方法检测其他相关立克次体和常见非立克次体病原菌，检出结果均为阴性。用该方法检测 立氏立克次体感染的豚鼠血液标本、小鼠脾脏标本及细胞培养标本，检测的结果与立氏立克次体感染 相关。结论研究建立的检测立氏立克次体实时荧光定量PCR方法具有高特异性和高敏感性，适用 于快速检测各种样本中的立氏立克次体和立氏立克次体感染早期的实验室诊断。 【关键词】 立氏立克次体；实时荧光定量，聚合酶链反应；敏感性；特异性 todetectRf础E讹缸 Onthe ofareaI—time reactiOn嬲say Study deVeIopment quantitativepolymera∞chain NIU richttsn M瞳iing，WENBo—hat，uQng—fhg，QIUL诹g，ZHANGJ妇g一 Dong-s沁ng，CHEN 6D．S￡Ⅱ抬K纠L口60m渤叫盯Pd施q酗，z口咒dB如5印“ri砂，Amd8my0，M珑f口删M缸i∞Zi研c酷，B已彬挖g 100071．China B俨^皖i，Email：bohaiwren@sohu．com G9rr巴，声。胛di胛g盘“抽or：’I，EN To areal一time chain for 【Abstract】Objective quantitativepolymerasereaction(PcR)assay develop Ri如已￡￡s如ric矗甜￡5“．MethodsThe and were to detecting primerSTaqMan—MGBprobe designedaccording from was the ofR．ri靠以￡s娩．ADNA of R．ri如以￡5iiPCR gene fragmento优户Bgeneamplified by o优pB 5 of of usedasastandard forthe ofthemethod．R幅ults template development copiesom声Bfmgments DNAof尺．r如胁f￡5打wasdetectedthe 尺．r碰以f5撕weredetected．Thegenomic by developedquantitative waS PCR DNAfromanotherrickettsialorbacterial nOtdetermined． However，the