纤维素酶活力的测定
(一) 实验目的 本检测方法是用来确定本公司纤维素酶类的催化活性。本方法适用于各种固体和液体纤维素酶制剂。
(二) 实验原理 纤维素被纤维素酶水解最终降解生成β-葡萄糖。鉴于纤维素结构的复杂性,没有任何一种酶能将纤维素彻底水解。1950 年 Reese提出了 C1-Cx概念。C1是一水解因子,作用于纤维素的结晶区(如棉花纤维即为高度结晶性纤维),使氢键破裂,呈无定形可溶态,成为长链纤维素分子。再由Cx最终催化形成还原性单糖。而Cx通常包括:(1)内切葡萄糖苷酶(endo-1,4-β-D-glucanase,EC3.2.1.4,简称 EG)。这类酶随机水解β-1,4-糖苷键,将长链纤维素分子(羧甲基纤维素钠(CMC)即为人工合成的一种线形纤维素钠盐)截短。(2)外切葡萄糖苷酶(exo-1,4-β-D-glucanase,EC3.2.1.91),又称纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase,简称 CBH)。这类酶作用于β-1,4-糖苷键,每次切下一个纤维二糖分子 。(3)β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,EC3.2.1.21,简称 BG),这类酶将纤维二糖(水杨素即为葡萄糖苷键连接的纤维二糖)水解成葡萄糖分子。 据上述理论,设计以滤纸(filter paper)、棉球、CMC、水杨素为底物,分别衡量纤维素的总体酶活性(FPA)、C
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