GB/T 35904-2018旋毛虫实时荧光PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 国； =11:. 中华人民 和国国家标准 GB/T 35904-2018 旋毛虫实时荧光 PCR 检测方法 Real-time PCR method for detection of 1richinellα spiralis 2018-02-06 发布 2018-09-01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 35904-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和同农业部提出。 本标准向全同动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC 1 81）归仁｜ 。 本标准起草单位： 东北农业大学、中华人民共和同黑龙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：宋铭忻、张子胖、李雅丽、韩彩霞、王海燕、李巍、李晓云、路义鑫。 I GB/ T 35904-2018 旋毛虫实时荧光 PCR 检测方法 1 范围 本标准规定了旋毛虫实时荧光PCR 检测的操作方法。 本标准适用于家猪、野猪和犬等动物的旋毛虫核酸检测。 2 规范应引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日 期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/ T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 仪器 3. 1 荧光PCR 仪。 3.2 高速冷冻离心机。 3.3 生物安全柜。 3.4 高压灭菌锅。 3.5 天平： 精密度达0. 01 g 以上。 3.6 组织匀浆机。 3.7 冰箱。 3.8 涡旋混合器。 3.9 研钵。 3. 10 元菌离心管。 3. 11 微量移液器。 4 试剂 4. 1 10 × PCR Buffer 缓冲液（元 Mg2+ ）、rTaq 酶、dNTP、 Mg2+ 等，所有试剂均为生物试剂公司生产。 4. 2 本方法试验用水符合GB/T 6682 规定的一级水。 5 对照样晶 5. 1 阳性对照样晶 含有5 条／g 以上的同际标准和I TrichinPlla 中iralis ( Tl）或 Trichi nP!la na tiv a ( T2）旋毛虫的大鼠 肉样。 5.2 阴性对照样品 经检测不含有旋毛虫的大鼠肉样。 GB/T 35904-2018 6 操作区域 样品处理区要有相应的生物安全设施； 配液区要求高度清洁；样品处理、加样和检测区应在不同区 域进行，不同区域配备不同的加l 样丁，具和用具。 7 样品采集和处理 7. 1 采样部位 7. 1. 1 家猪 横脯膜肌脚部、肋间肌、腰肌、咬肌、青肌。 7. 1.2 野猪 前肢肌、脑肌。 7. 1.3 犬 咬肌、青肌、脚肠肌。 7.2 样品采集 根据不同种类动物』同体的具体情况，川、采样部位各采样一块，记为一份肉样，总质量不少于 50 g ~ 100 L与炯体编戚相同号码。 7.3 样品处理 在样品处理区内进行， 将肉样去除脂肪、肌膜或脏膜， 用剪刀顺肌纤维方向， 按随机采样的要求，向